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新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是我国南方石斑鱼养殖产业中的一种重要病毒性病原,近年频繁爆发给水产养殖业带来了重大经济损失。在前期对SGIV分离、鉴定的基础上,我们对其基因组、转录组、蛋白质组进行了研究,结果表明SGIV ORF088编码的一个囊膜蛋白,初步实验揭示其可能在SGIV的黏附和侵入等过程中发挥重要作用,但是其在病毒感染过程中的具体作用机制尚不清楚。本研究利用重叠PCR和多片段同源重组等技术成功构建了含有乳糖操纵子系统的SGIV ORF088诱导型表达重组病毒(Recombiannt virus 088, RV-088),通过IPTG诱导调控VP088基因的表达与缺失。分别通过嘌呤霉素筛选、流式细胞仪分选及连续梯度稀释挑斑法进行重组病毒的纯化。获得纯化重组病毒后,病毒滴度实验表明,未加IPTG诱导的重组病毒(RV088-IPTG)比加入IPTG诱导的重组病毒(RV088+IPTG)的滴度显著降低。进一步基因转录分析表明,MCP、ORF136(LITAF)、ORF088、ORF086(ICP18)的转录表达水平也显著降低。尽管电镜观察结果表明,RV088-IPTG的病毒结构形态与RV088+IPTG没有显著变化,但是对病毒的进入特征研究表明,RV088-IPTG在病毒感染2h后进入的数量显著少于RV088+IPTG,由此推测VP088在SGIV病毒进入过程中可能发挥关键作用。综上结果表明,我们成功建立用IPTG诱导含有乳糖操纵子系统的重组石斑鱼虹彩病毒,为后期研究病毒的基因功能提供一种新的策略。在研究参与病毒进入,装配或释放过程中的病毒囊膜蛋白的同时,我们还尝试寻找参与病毒感染的宿主蛋白。在纯化SGIV病毒并进行病毒蛋白质谱鉴定的过程中,我们发现有7种宿主细胞蛋白,包括细胞骨架微丝肌动蛋白actin能够在提纯病毒过程中和病毒蛋白同时被纯化,并且western印迹实验证实actin在纯化病毒中存在,由此推测actin可能在病毒装配或释放过程中发挥重要作用。进一步免疫荧光实验结果表明,在病毒感染晚期,细胞变圆,大部分细胞微丝actin蛋白聚集到细胞表面,并且和SGIV病毒共定位。而且通过电镜观察表明,SGIV在装配完成后,需要获得宿主细胞质膜成分才释放形成完整的有囊膜的病毒颗粒。上述结果为actin在在病毒装配与释放过程中发挥着作用提供了一个佐证。接下来对actin和病毒蛋白相互作用的研究将进一步揭示actin在病毒侵染中的作用机制。