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目的：探讨NK细胞联合曲妥珠单抗对乳腺癌细胞体外杀伤作用是否存在协同效应，并对其机制进行初步探索。同时将体外培养扩增的原代NK细胞与NK-92MI细胞系的杀伤活性进行比较。方法：选取三种HER2表达情况不同的乳腺癌细胞系，即HER2（+++）乳腺癌细胞系BT-474，HER2（++）乳腺癌细胞系MDA-MB-453和HER2（—）乳腺癌细胞系MDA-MB-231，每种细胞系分别设置对照组、曲妥珠单抗组、NK细胞组、联合组；其中NK细胞组、联合组分别体应用体外培养原代NK细胞、NK-92MI细胞系进行实验。MTT法检测曲妥珠单抗对乳腺癌细胞、原代NK细胞和NK-92MI细胞增殖的影响；钙黄绿素释放法检测原代NK细胞与NK-92MI细胞系杀伤活性的差异，并验证曲妥珠单抗对NK细胞杀伤活性的协同作用；ELISA法检测曲妥珠单抗对原代NK细胞和NK-92MI细胞IFN-γ和TNF-α分泌的影响；流式细胞术检测曲妥珠单抗、NK细胞单独或联合作用后乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1、ULBP2、MICA）表达情况的变化。结果：1、曲妥珠单抗对HER2阳性乳腺癌细胞的增殖存在明显抑制作用，呈剂量、时间依赖性；与HER2（++）乳腺癌细胞相比，曲妥珠单抗对HER2（+++）乳腺癌细胞的增殖抑制作用更强；对HER2（—）乳腺癌细胞无抑制作用。2、体外培养的原代NK细胞和NK-92MI细胞对三种乳腺癌细胞均存在体外杀伤作用，其中以体外培养的原代NK细胞杀伤活性较强。3、曲妥珠单抗与原代NK细胞或NK-92MI细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤具有协同作用；与HER2（++）乳腺癌细胞相比，对HER2（+++）乳腺癌细胞的杀伤协同效应更明显。4、曲妥珠单抗增加原代NK细胞和NK-92MI细胞IFN-γ和TNF-α的分泌；同时曲妥珠单抗、NK细胞单独或联合作用后，HER2阳性乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1，ULBP2，MICA）表达存在不同程度上调，其中以联合作用后上调最显著。结论：曲妥珠单抗可抑制HER2阳性乳腺癌细胞增殖，与乳腺癌细胞表面HER2表达水平密切相关；曲妥珠单抗与NK细胞对HER2阳性乳腺癌细胞的杀伤作用存在协同效应，可能与曲妥珠单抗增加NK细胞IFN-γ、TNF-α分泌以及乳腺癌细胞表面NKG2D配体（ULBP1，ULBP2，MICA）表达上调有关。另外，与NK-92MI细胞系相比，体外培养的原代NK细胞杀伤活性更强。因此，对于HER2阳性乳腺癌患者，联合应用曲妥珠单抗和自体NK细胞过继治疗可能成为一项有效的治疗模式，NKG2D配体有望成为治疗潜在靶点。