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多发性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一种神经中枢系统(Central nervoussystem，CNS)的自身免疫性疾病，主要病理改变为中枢神经系统白质的脱髓鞘病变。该病发病率高，致残率高，病程漫长。据不完全统计，多发性硬化症的患病人数在世界人口约250万。中国目前没有准确的流行病学调查，但相关的文献和案例报告，多发性硬化症的发病人数在我国也逐年上升。目前临床上西医对MS的治疗方案虽已得到共识，但仍无特效治疗，临床疗效不满意，复发率、致残率均高。近年来的实践证明，中医药能有效改善神经症状，缓解复发症状，减少发作次数，弥补西医的不足。 目的: 本实验通过比较研究的方法，观察黄芪桂枝五物汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠基本情况、临床症状、病理变化、免疫炎性调节等方面的影响效果，从而探讨黄芪桂枝五物汤在多发性硬化中的免疫治疗机制及疗效，为多发性硬化临床治疗进一步提供实验研究证据。 方法: 1.按随机原则把32只SPF级6-8周龄Wistar雌性大鼠分成正常组、模型组、西药组、中药组4组，每组分别8只。 2.选用二次免疫法进行造模。 3.在第1天造模的同时给予灌胃药物。研究16天期间，各组大鼠每间隔24小时连续16天给予灌胃。其中正常组大鼠给予正常生理盐水（2ml/只）灌服;模型组大鼠给予正常生理盐水（2ml/只）灌服;西药组大鼠给予醋酸泼尼松(1mg/kg)灌服;中药组大鼠给予黄芪桂枝五物汤煎剂(11.88g/kg)灌服。同时每间隔24小时连续16天观察各组大鼠的精神状态、饮水量、进食、体重、排泄量等情况，同时进行神经功能评分。 4.各组大鼠于第17天采用过度麻醉方法处死，并收集外周血和脑组织，进行组织病理、ELISA检测IL-33及IL-35的含量、QPCR检查TLR4的表达。 结果: 1.正常组未出现临床损害症状。模型组8只大鼠于造模第2天后陆续发病，第3天逐渐出现神经功能损害症状，第11天达到发病高峰，发病比为8/8，死亡比为1/8。西药组8只大鼠于造模第2天后逐渐发病，第3天开始出现神经功能损害症状，第12天达到发病高峰，发病比为8/8，死亡比为0/8。中药组8只大鼠于造模第2天后逐渐发病，第4天开始出现神经功能损害症状，第14天达到发病高峰，发病比8/8，死亡比1/8。 2.治疗后各组临床症状神经功能评分比较，正常组无症状，模型组评分最高。西药组低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）;中药组神经功能评分低于西药组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3.治疗后各组潜伏期比较，模型组潜伏期最短，发病最快，中药组潜伏期最长，发病时间最慢。西药组潜伏期长于模型组，差异无统计学意义（P＞0.05）;中药组潜伏期长于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05);中药组潜伏期长于西药组，差异有统计学意义（P＜0.05）。 4.治疗后各组症状达高峰时间比较，模型组最短。西药组、中药组均长于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05);中药组长于西药组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 5.各组大鼠造模当天体重差异无统计学意义（P＞0.05）。造模后第11天、第16天各组大鼠体重比较，正常组最重，模型组及西药组最轻。模型组、西药组、中药组均轻于正常组，差异均有统计学意义（P＜0.05）;中药组重于模型组，差异有统计学意义(P＜0.05);中药组重于西药组，差异有统计学意义(P＜0.05);西药组略低于模型组，差异无统计学意义(P＞0.05)。 6.HE染色:正常组大鼠脑组织切片未见异常。模型组脑和脊髓切片发现在白质或白灰质交界处可见小血管扩张，部分小血管壁增厚，小血管周围有炎性细胞明显浸润，形成血管袖套样结构，周围神经髓鞘结构肿胀崩解呈碎片样结构。西药组、中药组与模型组对比，“袖套”状结构均有所减少，血管周围炎性细胞明显减轻，白质内见散在较多炎性细胞浸润。 7.治疗后各组IL-33比较，正常组最低，模型组最高。模型组高于正常组，差异有统计学意义（P＜0.05）;中药组、西药组低于模型组，差异均有统计学意义(P＜0.05);中药组高于西药组，差异均无统计学意义（P＞0.05）。 8.治疗后各组IL-35比较，正常组最高，模型组最低。模型组低于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05);西药组、中药组均低于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05);西药组高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）;中药组高于西药组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 9.治疗后各组TLR4比较，正常组最低，模型组最高。模型组、西药组、中药组均高于正常组，差异有统计学意义(P＜0.05);西药组、中药组均低于模型组，差异均有统计学意义（P＜0.05），西药组低于中药组，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 1.Wistar大鼠通过二次免疫法成功建立EAE模型;EAE大鼠体重减轻，出现明显的神经系统受损症状。 2.EAE大鼠潜伏期短，出现临床症状后较快达高峰，中枢神经系统炎性细胞浸润，外周血炎性细胞因子IL-33表达增多，IL-35表达减少，脑组织TLR4表达增多。 3.黄芪桂枝五物汤可延长EAE大鼠发病潜伏期及临床症状达高峰时间，同时减轻高峰期临床症状，减轻脑脊髓炎症细胞浸润，说明黄芪桂枝五物汤对EAE大鼠发病具有预防与治疗作用。 4.黄芪桂枝五物汤可减少EAE大鼠外周血IL-33和脑组织TLR4的表达。 5.黄芪桂枝五物汤可提高EAE大鼠外周血IL-35的表达。