高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)是由A型流感病毒中的部分H5和H7亚型毒株引起,主要侵袭家禽,引起高发病率、高死亡率的烈性传染病,世界动物卫生组织(OIE)动物卫生法规将其列为A类动物疫病。2003年12月至2004年2月期间,南韩、越南、日本、柬埔寨、泰国、中国、印度尼西亚、老挝相继报道家禽暴发H5N1亚型高致病性禽流感。高致病性禽流感的暴发不仅给养禽业造成直接经济损失,而且影响贸易的发展。本文基于H5N1亚型流感病毒基质蛋白、血凝素、神经氨酸酶基因,研究建立了A型及H5、N1亚型特异性RT-PCR检测方法,用于检测A型及H5、N1亚型流感病毒。进而研究建立了H5/N1、A/H5/N1特异性多重RT-PCR检测方法,用于同时检测和鉴别H5、N1亚型或A型及H5、N1亚型流感病毒。从核酸提取到基因扩增、检测在4-5小时内完成。采用所建立的RT-PCR和多重RT-PCR,分析16株禽流感和新城疫的病毒分离物或临诊样品,其结果与传统病毒分离鉴定完全一致,具有高敏感性和高特异性,且与相关病毒(如新城疫病毒)或其它亚型(H9N2)无交叉反应。采用A/H5/N1特异性多重RT-PCR检测80份2004年采自昆明地区不同家禽的棉试子样品,并与病毒分离鉴定方法比较,研究发现二者H5N1亚型鉴定结果完全吻合。表明该方法具有具有快速、简便、经济、安全、敏感、特异等优点,可作为临诊样品中禽流感病毒型及H5N1亚型鉴定和诊断以及病毒分布流行病学调查的有效方法。