亚低温对大鼠短暂性全脑缺血后APE/Ref-1表达、神经元凋亡的影响

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【研究目的】 1.探讨短暂性全脑缺血后APE/Ref-1在海马CA-1区的变化过程。 2.探讨短暂性全脑缺血后神经元凋亡在海马CA-1区发生情况。 3.探讨APE/Ref-1在海马CA-1区的变化及其与该区神经元凋亡之间的内在联系。 4.探讨采取亚低温干预措施后APE/Ref-1与神经元凋亡在短暂性全脑缺血后的海马CA-1区的变化情况。 5.探讨亚低温干预后APE/Ref-1的变化在亚低温脑保护作用中所起的作用。 【研究方法】 采用大鼠短暂性全脑缺血模型及亚低温方法,通过神经元尼氏体染色、TUNEL染色、APE/Ref-1蛋白免疫组化染色、APE/Ref-1蛋白免疫组化与TUNEL双重染色等方法,观察大鼠短暂性全脑缺血后海马CA1区神经元存活、凋亡、APE/Ref-1蛋白表达的情况及亚低温对之的影响。 【研究结果】 1.与假手术组相比,常温缺血组大鼠脑海马CA1区神经元缺失远较亚低温缺血组多(P<0.01)。 2.常温缺血组及亚低温缺血组脑海马CA1区均存在神经元凋亡。亚低温缺血组神经元凋亡出现的时间比常温缺血组迟,且凋亡数较常温组少(P<0.01)。 3.假手术组海马CA1区神经元广泛表达APE/Ref-1蛋白,常温缺血组及亚低温缺血组缺血后APE/Ref-1蛋白表达均有下降,亚低温缺血组APE/Ref-1蛋白表达下降程度较常温缺血组明显减轻(P<0.01)4.APE/Ref-1蛋白免疫组化与TUNEL且时间推迟。双重染色可观察到三种不同的细胞:APE瓜ef-1阳性细胞、TUNEL阳性细胞及既无APE瓜ef-1阳性又无TUNEL阳性的细胞。明显APE瓜e仁1阳性染色的核中见不到TUNEL阳性染色,反之,明显TUNEL阳性染色的核中亦见不到APE爪ef-1阳性染色。 5.APE/Ref-1阳性细胞和TUNEL阳性细胞时间变化图提示随着缺血后时间延长,APE/Ref-1阳性细胞逐渐减少,TUNEL阳性细胞逐渐增多。l研究结论l 1.采用双侧颈总动脉阻断+低血压法建立大鼠短暂性全脑缺血模型,此模型恒定、简单、重复性好。 2.大鼠短暂性全脑缺血模型所造成的病理损伤主要为脑海马CAI区神经元的迟发性死亡。 3.脑海马CAI区神经元的迟发性死亡主要为凋亡。 4.短暂性全脑缺血后海马CAI区表达APE/R ef-l下降,此下降早于凋亡细胞的出现。失去APE瓜ef-1免疫活性的神经元转变为TljNEL阳性细胞。 5.亚低温具有显著的神经元保护作用,能明显抑制缺血后APE/Ref-l下降,明显减少神经元凋亡。 6.缺血后DNA损伤和DNA修复机制的变化与神经元凋亡有关,亚低温可能通过保护机体自身DNA修复功能免遭破坏而发挥其神经保护作用。
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