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目的:细胞外信号调节激酶(ERK)在多种肿瘤细胞中有异常表达,与肿瘤的生长密切相关,本实验研究磷酸化ERK在肺癌细胞H460上的表达及对肺癌细胞生长的影响,探讨其在激发型CD40单克隆抗体(5C11)抑制H460肺癌细胞增殖中的作用。方法:以人肺癌细胞株H460为研究对象,以激发型CD40单克隆抗体(5C11)激发肺癌细胞中的CD40信号,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测5C11、ERK上游激酶MEK1抑制剂PD98059单独应用和两者联合应用(PD98059预处理30min)时对肺癌细胞增殖的影响;免疫荧光标记和流式细胞术测定5C11及PD98059作用肺癌细胞后细胞周期、细胞凋亡的改变情况以及5C11激发前后H460肺癌细胞上TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达情况;Western Blot检测CD40激发前后肺癌细胞中ERK1/2活性的变化,观察应用MEK1抑制剂PD98059阻断ERK上游信号传导后肺癌细胞中ERK1/2的活性。结果:(1)激发CD40分子可抑制表达CD40肺癌细胞H460的增殖,MEK1抑制剂PD98059同样可抑制肺癌细胞的增殖(p<0.05),各浓度组间无显著性差异(p>0.05),运用PD98059预处理肺癌细胞30min后激发型CD40单克隆抗体对肺癌细胞增殖的抑制作用更明显(p<0.05)。(2)激发CD40信号及应用PD98059后均可引起肺癌细胞中G1/G0期细胞的增加(p<0.05),S期细胞的减少,两者联合使用阻滞于G1/G0期的细胞数较5C11及PD98059单用时增加,但无统计学意义。(3)激发CD40信号及应用PD98059作用肺癌细胞72h后检测未见肺癌细胞的明显凋亡(p>0.05),PD98059与激发型单抗联合应用时可部分诱导细胞凋亡(p<0.05)。(4)表达CD40分子的肺癌细胞H460上可见有磷酸化ERK的表达,激发型单抗5C11处理肺癌细胞5min后即可见ERK磷酸化活性的增强,30min达最大值,4h后恢复至处理前水平,应用MEK1抑制剂PD98059处理细胞后可见细胞中磷酸化ERK水平的下降。(5)CD40信号激发后可见H460细胞表面TNFRⅠ的上调(p<0.05)及TNFRⅡ的下调(p<0.05)。结论:激发CD40信号可引起表达CD40的肺癌细胞H460增殖抑制,同时该信号的活化可使肺癌细胞中ERK活性增强,拮抗其抑制效应,使用ERK上游激酶MEK1抑制剂抑制ERK信号途径可显著提高激发型CD40单克隆抗体抑制H460细胞增殖的敏感性,提示细胞外信号调节激酶在肺癌细胞的生长中可能起重要的作用,抑制该信号途径在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。