【摘 要】
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非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一种慢性代谢性疾病,而非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是NAFLD的一种进展形式,NASH的发生涉及胰岛素抵抗、脂毒性、线粒体功能障碍、氧化应激、炎症反应等因素。前期的研究表明,蜂胶中的黄酮物质在HepG2细胞中可通过抑制ERK1/2-AHR-CYP1A1信号通路对乙醇诱导的肝损伤具有显著的保护作用。同时有研究表明,蜂胶黄酮能改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性,炎症、气
【基金项目】
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苏北科技专项-科技富民强县基金（编号:BC2013438）
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非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一种慢性代谢性疾病,而非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是NAFLD的一种进展形式,NASH的发生涉及胰岛素抵抗、脂毒性、线粒体功能障碍、氧化应激、炎症反应等因素。前期的研究表明,蜂胶中的黄酮物质在HepG2细胞中可通过抑制ERK1/2-AHR-CYP1A1信号通路对乙醇诱导的肝损伤具有显著的保护作用。同时有研究表明,蜂胶黄酮能改善NAFLD大鼠肝细胞脂肪变性,炎症、气球样变以及组织氧化应激。本研究运用细胞模型评价四种蜂胶黄酮（乔松素、高良姜素、柯因、柚皮素）对非酒精性脂肪性肝炎的改善作用,通过测定相关蛋白的表达以及一些相关的生理生化指标,从氧化应激、细胞凋亡、脂质积聚、炎症等方面探究蜂胶黄酮的可能作用机理。主要研究内容如下:利用0.9mMFFAs与HepG2细胞共同培养24h后,成功建立以细胞损伤、抗氧化性能下降、细胞凋亡、脂质异常积聚为特征的NASH脂肪变性细胞模型。（1）在抗氧化及抑制细胞凋亡方面,四种黄酮单体对FFAs所诱导的HepG2细胞培养上清中的ALT、AST水平的显著上升,细胞中ROS的含量显著增加、脂质过氧化指标MDA含量显著升高、抗氧化相关物质SOD的活性显著下降,均有一定程度的改善,且四种黄酮单体均可显著地抑制细胞凋亡。在抗氧化相关的性能方面,分子结构中具有三个羟基的乔松素和柚皮素效果最优,可显著逆转FFAs所诱导的转氨酶水平升高、ROS生成增多、脂质过氧化水平上升,并通过显著上调Nrf2表达提高抗氧化相关酶水平,恢复线粒体膜电位,改善氧化应激。（2）在细胞中脂质的积聚方面,四种黄酮单体作为AMPK的激活剂,可通过PTEN-Akt-mTOR路径以及AMPK-TSC1/TSC2-mTOR路径,显著上调PTEN的表达、促进AMPK的活化,以降低mTOR活性的形式,达到降低脂肪酸合成和脂肪酸摄取的效果,有效抑制FFAs诱导的HepG2细胞中脂质的积聚。（3）在炎症反应方面,四种黄酮单体可通过上调PTEN的表达,抑制p65的磷酸化、阻止p65的核移位,抑制NF-κB的经典激活途径,显著减少炎症因子IL-1β的产生,改善炎症反应;同时,通过p65与mTOR的互作,减少进入细胞核的p65的量,防止其与其他NF-κB亚基形成二聚体,活化下游炎症相关基因的表达,经由PTEN-NF-κB-mTOR路径,显著抑制炎症反应。在FFAs诱导的HepG2细胞中,四种蜂胶黄酮在保护细胞免受氧化应激、防止细胞凋亡、抑制脂质的异常积聚和炎性损伤方面具有显著作用,有助于缓解NAFLD向NASH的进展。
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