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细胞色素P450单加氧酶（Cytochrome P450，CYP），是一类催化单加氧反应酶的超家族，它广泛地存在于从低等的微生物到高等的哺乳动物等各种生命体中。CYP具有代谢众多生命体内源和外源性物质的功能。这类酶能表现出特殊的光谱性质，其还原态与CO结合后，能在450nm处产生特征吸收峰，这也是P450得名的缘由。 Rhodococcus sp.R04基因组测序发现，Rhodococcus sp.R04中含有至少15种细胞色素P450单加氧酶，它们分别从属于13个家族，并由Cytochrome P450命名委员会予以命名，它们分别是CYP102C3、CYP116B4、CYP123A6、CYP125A18、CYP125B2、CYP136C4、CYP136C5P、CYP150A16、CYP152F1、CYP153A32、CYP185B1、CYP186C1、CYP255A3、CYP255A4和CYP51B1。通过序列比对发现这15种细胞色素P450单加氧酶的总相似性仅有14.64％，但其比对结果显示所有的P450酶都具有保守的螺旋K区“EXXR”与血红素结合区“FGXGXXXCXG”。系统发育分析表明，CYP125A18、CYP125B2与Rhodococcus sp.RHA1和Mycobacterium tuberculosis中的CYP为同一族群，而该族群被证实能催化cholest-4-en-3-one的27位碳原子并能进入细胞质中催化胆固醇侧链的碳原子，另外CYP125家族与Pseudomonas sp.的P450terp有相同的起源，此酶具有α-松油醇羟化酶活性。 基因注释表明，Rhodococcus sp.R04中有两种CYP125，分别是CYP125B2和CYP125A18。我们对这两种CYP125进行了克隆、表达纯化以及相关性质的研究。结果表明，氧化态CYP125B2和CYP125A18在417.5和422nm出现特征吸收峰，还原态CYP125B2和CYP125A18与CO结合后，与氧化态的差示光谱显示它们在450和458nm会产生差示峰，这与一般的细胞色素P450单加氧酶的典型特征相同。同时运用光学滴定法测定克霉唑，硝酸益康唑，甲硝唑，酮康唑，4-苯基咪唑和4-甲基-2-苯基咪唑六种不同的唑类药物与CYP125B2和CYP125A18的相互作用，并计算Kd值，分析这几种唑类药物分别与CYP125B2和CYP125A18的结合程度，实验结果表明CYP125B2与六种唑类药物的结合程度依次是4-苯基咪唑＞硝酸益康唑＞克霉唑＞酮康唑＞4-甲基-2-苯基咪唑＞甲硝唑，而CYP125A18是酮康唑＞硝酸益康唑＞克霉唑＞4-甲基-2-苯基咪唑＞甲硝唑＞4-苯基咪唑。 目前，我们已经发现Rhodococcus sp.R04能够在以胆固醇为唯一碳源的培养基上生长，并且能将胆固醇转化，但所生成物质的结构尚不明确。另外，据报道CYP125在降解胆固醇，类固醇等脂肪族化合物中起关键作用。我们推测Rhodococcus sp.R04中的CYP125B2和CYP125A18两种CYP125参与了Rhodococcus sp.R04降解胆固醇的途径，但它们在这一过程中的具体作用还是未知的，尚需进一步的实验证明。