合成多肽中杂质的分子结构和化学性质与目标物十分相似,反相高效液相色谱是目前分离纯化多肽的主要手段。本研究中,为了克服反相介质常用的硅胶填料固有问题,通过实验室前期的工作进展,采用膜乳化-悬浮聚合方法制备出粒径13.7μm,粒径分布系数Rspan为0.74,孔径为14 nm,比表面积为230 m2·g,孔隙率为65%,尺寸均一的聚苯乙烯-二乙烯基苯(PSt)微球。1、利用制备的PSt微球,对其进行物理性质的分析和机械性能的考察,优化装柱工艺,对装柱过程中顶替液、匀浆液、装柱压力等装柱条件进行考察,制备了性能较高柱效达到10000的液相色谱柱(φ4.6×250mm)。2、利用前期制备的高效液相色谱柱考察醋酸奥曲肽8肽的分离纯化,结合质谱和核磁对分离产物进行定性和定量的分析,实现了奥曲肽从固相合成粗品中快速有效分离奥曲肽纯度由42.89%提高到99.99%,优于C18商品柱(ZORBAX SB,(?)4.6×50 mm,5μm)。3、利用前期制备的高效液相色谱柱考察艾塞那肽39肽的分离纯化,结合质谱和核磁对分离产物进行定性和定量的分析,纯度由54.86%降低到43.36%,PSt柱对艾塞那肽没有起到很好的分离效果。选择GESource30Q阴离子交换介质,分别考察三类色谱柱(分析型不锈钢柱、半制备不锈钢柱、半制备玻璃柱),其中半制备不锈钢柱回收率86.51%,分离纯度95.12%,分离效果最佳。应用以苯乙烯为骨架的离子交换剂达到了很好的分离效果,很好的说明聚苯乙烯在艾塞那肽分离纯化中可以广泛的应用。4、利用PSt色谱柱检测其他金属螯合介质在分离过程中NTA的脱落情况,衍生法最低检测限度为0.5 mg-L, HPLC法最低检测限度为1μg·L,说明聚苯乙烯介质在分析检测领域的广泛应用。