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背景介绍:
CXCL12是中枢神经系统发育中一个重要的细胞因子,属于趋化因子蛋白家族,又称为基质细胞衍生因子,早年的研究主要关注在它在免疫系统中的趋化作用,和对血管生成和造血功能方面的影响。但近年研究表明CXCL12和其受体在脑组织中大量表达,且CXCL12可以促进中枢神经系统特别是DRG神经轴的生长,CXCL12的缺失还能抑制皮层神经元向大脑表层迁移。CXC12在小脑,海马和大脑皮质的发育中发挥了重要的作用。乙酰胆碱是与学习和记忆最为密切的神经递质,并且胆碱能神经突触更被认为是“记忆突触”。一些退行性疾病如早老性痴呆,患者在学习和认知等方面存在明显得缺陷。研究证实这些患者海马中的乙酰胆碱水平明显降低,同时伴有神经元的丢失,这可能是造成学习和认知缺陷的重要原因。海马作为学习记忆的中心,其功能与神经递质的代谢有密切关系,因此本实验选用海马神经元作为研究对象,乙酰胆碱系统作为观察对象。本实验室最近的研究发现CXCL12通过与其受体CXCR4结合,可促进离体培养的大鼠海马神经元Ach的分泌。有报道在大鼠体内CXCL12作用于CXCR4后可激活AKT信号通路,进而调节骨髓间充质干细胞的迁移。但是CXCL12/CXCR4作用于大鼠海马神经元后是否通过激活AKT信号通路而引起Ach含量的改变,目前尚未见文献报导。
目的:
观察CXCL12/CXCR4通过PI3k/AKT信号通路对体外培养的海马神经细胞神经递质乙酰胆碱合成,分泌和水解的影响。
方法:
原代培养大鼠海马神经元并鉴定;采用ELISA方法分别检测和CXCL12对海马神经细胞乙酰胆碱分泌的影响和乙酰胆碱水解酶(ACHE)的活性,PI3K/AKT阻断剂(LY2940002)阻断PI3K/AKT信号通路后乙酰胆碱含量和乙酰胆碱水解酶活性的变化:采用Western blot方法观察CXCL12对PI3K/AKT信号通路对高亲和力胆碱转运体(CHT1)和囊泡乙酰胆碱转运体(VAChT)蛋白质表达量的影响;RT-PCR检测CHT1和VAChT mRNA表达量的变化。
结果:
(1)CXCL12可引起海马神经元AKT号通路磷酸化水平明显升高,AMD3100可抑制CXCL12引起的AKT信号通路激活。
(2)CXCL12促进离体培养的海马神经元Ach的分泌,加入LY294002后能阻断此作用。
(3)CXCL12可促进离体培养的海马神经元CHT1和VACHTmRNA和蛋白质的表达水平,而抑制剂LY294002可阻断此作用。
(4)CXCL12可抑制离体培养的海马神经元AChE的酶活性,加入LY294002后此抑制作用被阻断。
结论:
在离体培养的海马神经元中CXCL12通过CXCR4促进了CHT1和VACHT的表达,抑制了AChE的活性,进而增加Ach在胞内的含量,该机制与AKT信号通路有关。