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人体内肾上腺皮质激素的含量与高血压、高血糖等疾病有关，是肾上腺增生、库欣综合症、醛固酮增多症等内分泌疾病的检测指标。本研究以人血清中的醛固酮、皮质醇、皮质酮和可的松皮质激素作为研究对象，采用同位素稀释(Isotope Dilution，ID)法，建立基于超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(UPLC-MS/MS)的人血清皮质激素定量分析方法。研究内容分为三部分，具体如下：
首先，建立了皮质激素的UPLC-MS/MS分析方法，确定和优化皮质激素及其内标物的质谱参数，筛选适合皮质激素分离的色谱柱，建立和优化了UPLC色谱分离条件。优化后的色谱条件为：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱，色谱柱温30℃，流速0.3mL/min，流动相为乙腈/0.01mM氨水溶液，本研究建立的皮质激素质谱测定方法具有灵敏度高、选择性强的特点。
其次，对人血清样本前处理方法进行研究。考察不同种类的萃取剂对血清皮质激素提取效率的影响，建立了硫酸锌蛋白沉淀结合叔丁基甲基醚液液萃取的两步法皮质激素提取方案。优化后的条件为：纯溶剂叔丁基甲基醚和0.3mol/L硫酸锌溶液，叔丁基甲基醚体积1000μL，蛋白沉淀剂体积5μL。所开发的人血清样本前处理方法操作简单。
最后，对人血清皮质激素的ID-UPLC-MS/MS定量方法进行方法学验证，考察方法的适用性和可靠性，包括仪器的精密度、线性范围、定量限和检出限，方法的专属性、检出限、定量限、线性范围、回收率、基质效应和稳定性。结果显示，醛固酮线性范围在0.05-20ng/mL，皮质醇、皮质酮和可的松的线性范围在0.02-20ng/mL，线性相关系数在0.995以上。提取回收率55.5-90.8%，方法回收率91.0-101.2%，日内精密度小于13.1%，日间精密度小于17.8%。基质效应为85.9-108.5%，冻融稳定性90.2-109.6%，溶液稳定性82.0-104.0%。本研究的ID-UPLC-MS/MS定量检测方法准确度高、稳定性好、基质效应弱，可以用于人血清皮质激素含量检测，为内分泌疾病诊断与治疗提供技术参考。
首先，建立了皮质激素的UPLC-MS/MS分析方法，确定和优化皮质激素及其内标物的质谱参数，筛选适合皮质激素分离的色谱柱，建立和优化了UPLC色谱分离条件。优化后的色谱条件为：ACQUITYUPLCBEHC18色谱柱，色谱柱温30℃，流速0.3mL/min，流动相为乙腈/0.01mM氨水溶液，本研究建立的皮质激素质谱测定方法具有灵敏度高、选择性强的特点。
其次，对人血清样本前处理方法进行研究。考察不同种类的萃取剂对血清皮质激素提取效率的影响，建立了硫酸锌蛋白沉淀结合叔丁基甲基醚液液萃取的两步法皮质激素提取方案。优化后的条件为：纯溶剂叔丁基甲基醚和0.3mol/L硫酸锌溶液，叔丁基甲基醚体积1000μL，蛋白沉淀剂体积5μL。所开发的人血清样本前处理方法操作简单。
最后，对人血清皮质激素的ID-UPLC-MS/MS定量方法进行方法学验证，考察方法的适用性和可靠性，包括仪器的精密度、线性范围、定量限和检出限，方法的专属性、检出限、定量限、线性范围、回收率、基质效应和稳定性。结果显示，醛固酮线性范围在0.05-20ng/mL，皮质醇、皮质酮和可的松的线性范围在0.02-20ng/mL，线性相关系数在0.995以上。提取回收率55.5-90.8%，方法回收率91.0-101.2%，日内精密度小于13.1%，日间精密度小于17.8%。基质效应为85.9-108.5%，冻融稳定性90.2-109.6%，溶液稳定性82.0-104.0%。本研究的ID-UPLC-MS/MS定量检测方法准确度高、稳定性好、基质效应弱，可以用于人血清皮质激素含量检测，为内分泌疾病诊断与治疗提供技术参考。