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【背景】肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是一种侵袭性强、死亡率高的恶性肿瘤,是目前我国最常见的恶性肿瘤之一,由于肝切除术后复发转移率高,肝癌的远期预后仍不理想。因此,寻找能够反映肿瘤临床分期、复发转移和预后的标志物将对肿瘤的治疗具有重要价值。【目的】本研究旨在探讨Lnc RNA（CTB-193M12.5）与肝细胞性肝癌的临床相关性。【方法】我们收集了78例患者肝细胞癌的组织及癌旁正常组织（>3cm）及其中部分患者的血清。所有患者在手术前未进行放化疗治疗。组织样本在手术离体后立即以液氮冷冻并储存在-80℃用于进一步分析,血标本为患者入院后抽取离心后低温保存。将其中3对肝癌患者的肝癌及癌旁组织进行测序分析,并用DAVID软件做功能富集分析、cytoscape软件构建竞争性结合关系网络图,筛选出相关的Lnc RNAs,并挑选敏感度高的Lnc RNA进行后续实验。RT-PCR检测肝癌患者的肝癌及癌旁组织中的CTB-193M12.5及mi R-195-5p表达高低差异,并分析CTB-193M12.5表达水平与患者临床预后的相关性;并分析同一组织中CTB-193M12.5及mi R-195-5p的相关性。通过q PCR及免疫组化检测肝癌及癌旁组织中HMGA1的表达差异。【结果】通过对测序结果进行生物信息学分析,我们选择了CTB-193M12.5/mi R-195-5p/HMGA1这一预测通路。我们发现:CTB-193M12.5在肝癌患者肿瘤组织及血清中的表达显著增加;肝癌组织中CTB-193M12.5表达高的患者,肿瘤分期较晚,预后较差;同一肝癌组织中,CTB-193M12.5表达与mi R-195-5p表达呈负相关性,而与HMGA1呈正相关,此外,相较于癌旁组织,HMGA1在肝癌中表达上调,而mi R-195-5p表达下调。【结论】CTB-193M12.5与肝细胞性肝癌具有明显的临床相关性,而其作用机制可能与其调控mi R-195-5p及HMGA1相关。【背景】在第一部部分的研究中,我们发现CTB-193M12.5高表达于HCC组织中并且与肿瘤进展及预后明显相关。CTB-193M12.5在肿瘤组织中的表达与mi RNA mi R-195-5p呈负相关而与靶蛋白HMGA1呈正相关。提示CTB-193M12.5可能通过调节mi RNA mi R-195-5p与HMGA1从而发挥作用。但相关机制仍需明确。【目的】本文旨在探讨CTB-193M12.5促进肝细胞性肝癌的增殖与进展的具体机制。【方法】根据第一部分实验结果,我们筛选出差异最为显著的lnc RNA CTB-193M12.5、mi RNA mi R-195-5p及靶蛋白HMGA1进行后续实验。选择两株敏感的肝癌细胞（Hep G2,SMMC-7721）进行体外功能实验。2.1通过质粒构建CTB-193M12.5干扰载体,转染肝癌细胞后,通过RT-PCR检测各个载体的干扰效率,筛选载体进行后续实验;2.2采用CCK-8、EDU检测转染后的肝癌细胞的增殖活力,通过划痕实验、Transwell检测肝癌细胞的侵袭及迁移能力;分析si CTB-193M12.5对HCC细胞增殖和侵袭迁移的影响;2.3构建裸鼠皮下成瘤模型,研究si CTB-193M12.5组对裸鼠HCC移植瘤生长的抑制作用;2.4 RT-PCR方法筛选与CTB-193M12.5竞争性结合最紧密的mi RNA;2.5双荧光素酶实验验证CTB-193M12.5与mi R-195-5p是否能竞争性结合,并分析mi R-195-5p对下游靶基因HMGA1的表达影响;2.6在不同时间点分别将四组Mi R-NC、mi R-195-5p、mi R-195-5p+pc DNA-NC、mi R-195-5p+pc DNA/CTB-193M12.5分别转染肝癌细胞系SMMC7721和Hep G2,采用CCK-8方法、EDU检测肝癌细胞的增殖活力,通过划痕实验、Transwell检测肝癌细胞的侵袭及迁移能力,分析CTB-193M12.5对mi R-195-5p的调控作用在HCC细胞增殖生长及侵袭中的影响;2.7构建载体将Mi R-NC、mi R-195-5p、mi R-195-5p+pc DNA-NC、mi R-195-5p+pc DNA/CTB-193M12.5,si RNA-NC、si CTB-193M12.5、pc DNA-NC、pc DNA/CTB-193M12.5转染HCC细胞,利用Western blot进一步检测各组细胞中HMGA1的表达情况;2.8应用Western blot分别检测si RNA—NC、si CTB-193M12.5转染的Hep G2细胞中EMT信号通路相关蛋白的表达。【结果】我们发现:2.1我们所构建的si-CTB-193M12.5-1、si-CTB-193M12.5-2都是针对CTB-193M12.5序列的特异性干扰载体,其中si-CTB-193M12.5-1干扰效率超过70%,可用于后续实验。2.2与NC及si RNA-NC转染组相比,在si CTB-193M12.5转染48h后,SMMC-7721和Hep G2细胞的增殖活力及侵袭迁移能力都显著下降。2.3与si RNA-NC组相比,si CTB-193M12.5转染组肿瘤生长速度明显降低,肿瘤体积较小。2.4 RT-PCR结果显示,仅有mi R-195-5p在si CTB-193M12.5转染的SMMC7721和Hep G2细胞中比si RNA-NC转染组中的表达显著升高（P<0.01）;而其余3个mi RNAs的表达无明显变化或有轻微变化（P>0.01）。2.5与mi R-NC共转染组相比,mi R-195-5p共转染的SMMC-7721和Hep G2细胞中,p MIR-CTB-193M12.5-WT的相对荧光素酶活性分别下降了56%、51%:而p MIR-CTB-193M12.5-Mut的相对荧光素酶活性无明显变化;同时,mi R-195-5p会抑制下游靶基因HMGA1的表达。2.6 mi R-195-5p组与mi R-NC组相比,肝癌细胞系SMMC7721和Hep G2的细胞增殖活力与侵袭迁移能力明显下降;mi R-195-5p+pc DNA/CTB-193M12.5组比mi R-195-5p+pc DNA-NC组细胞增殖活力与侵袭迁移能力明显增强。2.7与mi R-NC或si RNA-NC组相比,mi R-195-5p转染SMMC-7721细胞以及si CTB-193M12.5转染Hep G2细胞可明显降低HMGA1 m RNA及蛋白的表达（P<0.01）;与pc DNA-NC组相比,pc DNA/CTB-193M12.5转染Hep G2细胞中HMGA1 m RNA及蛋白的表达明显升高（P<0.01）:另外,与mi R-195-5p+pc DNA—NC组相比,mi R-195-5p+pc DNA/CTB-193M12.5共转染SMMC-7721细胞中HMGA1 m RNA及蛋白一定程度上能恢复表达。2.8与si RNA-NC组相比,si CTB-193M12.5转染的Hep G2细胞中EMT表达水平明显降低（P<0.01）;与pc DNA-NC组相比,pc DNA/CTB-193M12.5转染的SMMC7721细胞中EMT蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。另外,与pc DNA/CTB-193M12.5+si-NC组相比,pc DNA/CTB-193M12.5+si-HMGA1共转染Hep G2和SMMC7721细胞后,可使EMT蛋白表达水平显著降低。【结论】CTB-193M12.5能发挥ce RNA机制,与mi R-195-5p竞争性结合,它们的下游靶达,加速EMT的进展,促进肿瘤的恶性进程;有可能为进一步研究肿瘤新的作用靶点提供指导意义。