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目的:研究抵抗素样分子β(RELM-β)与野百合碱致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的关系,探讨PLC-IP3/Ca2+信号通路在此过程中的作用机制。方法:1.观察野百合碱是否促进或抑制大鼠PASMCs增殖。进一步调控RELM-β的表达水平,观察野百合碱是否通过PLC-IP3/Ca2+信号通路影响大鼠PASMCs的增殖:实验分组:1、盐水对照组(空白对照组)2、野百合碱组3、空载慢病毒生理盐水组(空载对照组)4、空载慢病毒野百合碱组(空载MCT组)5、沉默慢病毒RELM-β生理盐水组(沉默对照组)6、沉默慢病毒RELM-β野百合碱组(沉默MCT组)7、过表达慢病毒RELM-β生理盐水组(过表达对照组)8、过表达慢病毒RELM-β野百合碱组(过表达MCT组)。将SD大鼠原代PASMCs体外培养传至3-5代,加入野百合碱(1umol/L,48h),通过慢病毒转染至大鼠PASMCs,调控细胞的RELM-β表达水平。EDU检测观察大鼠PASMCs的增殖,QT-PCR和Western blot分别检测PASMCs 中 RELM-β、PLC、IP3R mRNA 和蛋白表达。(2)探索RELM-β通过调控PLC-IP3/Ca2+信号通路影响PASMCs增殖:用同样的方法取SD大鼠原代PASMCs体外培养传至3-5代,同步化处理后分别加入重组RELM-β蛋白及信号通路抑制剂,将实验分为空白对照组、重组RELM-β蛋白对照组、PLC抑制剂(U73122)加重组RELM-β蛋白组、IP3R抑制剂(Xestosβongin C)加重组RELM-β蛋白组共4组。EDU细胞增殖检测观察PASMCs的增殖情况,流式细胞术检测细胞内钙离子浓度,QT-PCR和Western blot分别检测PASMCs中RELM-β、PLC、IP3R mRNA和蛋白表达情况。结果:1.第一部分实验:野百合碱、RELM-β通过PLC-IP3/Ca2+信号通路影响(促进/抑制)大鼠PASMCs增殖:EDU结果显示:MCT组与空白对照组比较细胞增殖率增加(P<0.05)。沉默MCT组与空载MCT组比较:细胞增殖率减少(P<0.05);过表达MCT组与空载MCT组比较:细胞增殖率增加(P<0.05)。QT-PCR、Western blot 检测 PASMCs 中 RELM-β、PLC、IP3R mRNA及蛋白的表达水平结果显示:与空白对照组比较,MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均升高(P<0.05);与空载MCT组比较,沉默MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平降低(P<0.05);与空载MCT组比较,过表达MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均明显升高(P<0.05);与空载对照组比较,沉默对照组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均降低(P<0.05);与空载对照组比较,过表达对照组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均明显增加(P<0.05)。2.第二部分实验:RELM-β和PLC-IP3/Ca2+信号通路对PASMCs增殖的影响:Edu检测PASMCs细胞增殖率结果显示:重组RELM-β蛋白对照组与空白对照组比较,细胞增殖率增加(P<0.05),细胞内钙离子平均荧光强度增加(P<0.05);PLC抑制剂加重组RELM-β蛋白组与重组RELM-β蛋白对照组比较,细胞增殖率减少(P<0.05),细胞内钙离子平均荧光强度减少(P<0.05);IP3R抑制剂加重组RELM-β蛋白组与重组RELM-β蛋白对照组比较,细胞增殖率减少(P<0.05),细胞内钙离子平均荧光强度减少(P<0.05)。QT-PCR、Western blot检测PLC、IP3R mRNA及蛋白表达水平,流式细胞术测细胞内钙离子结果显示:与空白对照组比较,RELM-β重组蛋白对照组PLC、IP3R mRNA及蛋白表达水平增加(P<0.05);分别与重组RELM-β蛋白对照组比较,PLC抑制剂加重组RELM-β蛋白组、IP3R抑制剂加重组RELM-β蛋白组两组的PLC、IP3R mRNA及蛋白水平均明显降低(P<0.05)。结论:1、野百合碱促进大鼠PASMCs增殖,RELM-β可以调节野百合碱致大鼠PASMCs增殖;2、RELM-β通过PLC-IP3/Ca2+信号通路促进野百合碱致大鼠PASMCs的增殖情况。