【摘 要】
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四倍体刺槐是一种多用途、速生、耐旱树种.以耐旱基因进一步提高其耐旱性有望成为西部干旱和半干旱地区植树造林的先锋树种."四倍体刺槐、杨树抗旱、抗虫新品种培育"(2001AA2
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四倍体刺槐是一种多用途、速生、耐旱树种.以耐旱基因进一步提高其耐旱性有望成为西部干旱和半干旱地区植树造林的先锋树种."四倍体刺槐、杨树抗旱、抗虫新品种培育"(2001AA244041)为国家高技术研究发展计划(863计划)课题,得到中科院遗传所的协议许可,使用山菠菜转录因子基因DREB(专利号01123827.5).该文研究农杆菌AGL1介导转化该DREB基因转化提高四倍体刺槐K2耐旱性,建立了该基因转导刺槐K2的技术体系,得到PCR鉴定为阳性的转化株系1个,为今后改良大多数林木耐旱性奠定基础.建立了速生型刺槐K2组织培养体系.初春未萌发的刺槐枝条在人工气候箱内水培催芽,以腋芽生长的嫩茎作为外植体;外植体表面灭菌的最佳方式为去污剂洗刷嫩茎5min,流水冲洗30min,在超净工作台上以70%的乙醇表面灭菌30s,0.1%升汞溶液灭菌3min,或用有效氯0.5%的次氯酸钠灭菌4~6min.优化的最佳分化培养基为MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.03mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L.生根14d的小植株,分别通过两步法炼苗和移栽,成活率达90%以上.刺槐K2叶片在培养基MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L上诱导愈伤组织,并能够诱导不定芽的发生.速生型刺槐K2遗传转化体系的研究,确定了抗生素三重筛选转化植株的敏感浓度,不定芽诱导、分化、生根培养基中添加的潮霉素浓度分别为10、6、1.8mg/L.pCAMBIA1301-rd29A-DREB表达载体直接转化的农杆菌AGL1+AS100μM/L浸染刺槐K2叶片15~20min,共培养2d,转移到抗生素三重筛选培养基上诱导植株再生,获得转化植株,经PCR分子鉴定,30个转基因株系中1个显示阳性印迹.以TTC-SWC法测定了刺槐K2干旱不同时间的根系活力和土壤含水量,该树种在北京褐土上的耐旱性确定为SWC 6%.
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