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背景与目的:原发性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是世界上常见的恶性肿瘤之一,其恶性程度高,发展迅速,若治疗不及时或治疗方案选择不当,平均生存时间为半年。中国是HCC高发区,约占全球患者的55%,而厦门市同安区是中国两大肝细胞癌高发区之一,年发病率在十万分之三十以上。由于肝细胞癌早期不易发现,患者大多错失最佳手术时机。目前的常规化疗药物疗效不佳,致使肝细胞癌的治愈率较低。因此,研究HCC的发生发展机制,探明重要的相关基因,将为HCC的诊治提供新的思路,对攻克肝细胞癌意义重大。本课题以人肝癌细胞株BEL-7402为研究对象,通过检测全反式维甲酸对肝癌细胞增殖、凋亡以及Cks1、Cks2基因蛋白表达的影响,分析瘤细胞增殖、凋亡与Cks1、Cks2表达的相关性,初步探讨可能存在的作用机制,为全反式维甲酸治疗肝癌提供理论和实验依据,为Cks1、Cks2基因及蛋白进一步的实验研究积累经验。方法:1、MTT法测定ATRA对BEL-7402细胞增殖的影响,实验组加入相应量的ATRA至终浓度为（0.1,1,5,10,20）μmol/L,对照组只加相应量的RPMI 1640,分别于加药后继续培养24 h、48 h、72 h、96 h检测各组细胞和对照组及相邻实验组间增殖抑制率的差异。2、流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测ATRA对BEL-7402细胞周期及凋亡的影响,实验组加入相应量的ATRA至终浓度为10μmol/L,对照组加入1‰的无水乙醇,于加药后继续培养24 h、48 h、72 h检测各组细胞周期分布和凋亡的差异。3、RT-PCR法检测ATRA对BEL-7402细胞Cksl、Cks2基因mRNA表达的影响,实验组加入相应量的ATRA至终浓度为10μmol/L,对照组加入1‰的无水乙醇,于加药后继续培养24 h、48 h、72 h检测各组细胞之间Cks1、Cks2基因mRNA表达的差异。4、免疫细胞化学ABC法检测ATRA对BEL-7402细胞Cks1、Cks2、P27蛋白表达的影响,实验组加相应量的ATRA至终浓度为10μmol/L,对照组加入1‰的无水乙醇,于加药后继续培养24 h、48 h、72 h检测Cks1、Cks2、P27蛋白表达的变化,采用HSCORE积分法分析ATRA对Cks1、Cks2、P27蛋白表达的影响。结果:1、ATRA对BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用,抑制效应呈现明显的时间、剂量依赖性。10μmol/L组ATRA作用24小时抑制率为17.45±1.93,96小时抑制率达到50.23±2.44。各组之间的吸光度A值和抑制率IR相比差异有显著统计学意义（P＜0.01）。2、BEL-7402细胞经10μmol/L ATRA作用后,细胞周期各期细胞比例发生明显变化,随培养时间延长,G0-G1期细胞比例不断增高,细胞大量阻滞在G0-G1期,对照组G0-G1期细胞平均为59.87±1.07,ATRA作用72小时后升高到72.78±1.13,S期细胞比例相应下降,G2/M期细胞比例各组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。3、10μmol/LATRA作用24小时引起部分BEL-7402细胞发生凋亡6.48±0.45,并随作用时间延长,细胞凋亡率不断增加,72小时凋亡率达到17.31±1.00,实验组和对照组及各时间组间比较差异有显著统计学意义（P＜0.01）。4、ATRA对Cks1、Cks2基因mRNA表达无明显影响（P＞0.05）。5、BEL-7402细胞随ATRA作用时间延长,Cks1、Cks2蛋白表达量呈减低趋势,Cks1组化染色HSCORE积分从1.88±0.06降低到1.47±0.06,Cks2组化染色HSCORE积分从1.58±0.09降低到1.39±0.03,而P27蛋白表达量不断增加,组化染色HSCORE积分从2.32±0.08升高到2.97±0.11,各组之间的HSCORE积分相比差异均有显著统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。结论:1、全反式维甲酸对BEL-7402绌胞具有明显的增殖抑制作用,并呈现一定的时间、剂量依赖性。2、全反式维甲酸具有诱导BEL-7402细胞凋亡的作用。3、全反式维甲酸不影响BEL-7402细胞Cks基因mRNA的表达,却能够在蛋白水平减低Cks蛋白的表达,增强P27蛋白的表达。4、全反式维甲酸抑制BEL-7402细胞增殖,使大量细胞阻滞在G0-G1期,可能通过下调Cks1蛋白的表达,从而抑制P27蛋白的泛素化降解,使得P27蛋白在细胞内积聚,对细胞周期起负调控作用。5、全反式维甲酸诱导BEL-7402细胞凋亡的分子机制可能与Cks2蛋白表达下调有关。