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第一部分:IL-17在阿霉素肾病大鼠肾小球硬化中的作用研究目的:观察IL-17在阿霉素肾病大鼠肾组织中的表达,并探讨其在阿霉素肾病肾小球硬化中的作用。方法:雄性SD大鼠分为正常对照组,阿霉素肾病组(模型组),于第2、4、8、12周分别处死8只大鼠。光镜观察肾小球的病理学情况并分析肾小球硬化指数;采用半定量RT-PCR法检测肾组织IL-17mRNA的表达;ELISA检测肾组织匀浆上清中IL-17、IL-1β蛋白水平;免疫组化观察IL-17在肾脏的定位表达。结果:第8周模型组肾组织IL-17mRNA水平、IL-17和IL-1β蛋白水平均高于正常组(均P<0.05);第12周均进一步升高(P<0.01),并且IL-17与IL-1β、肾小球硬化指数均呈明显的正相关(P<0.05)。结论:IL-17可能在阿霉素肾病大鼠模型发生肾小球硬化过程中起到重要的作用。第二部分:Th17/Treg细胞在儿童原发性肾病综合征中的表达及其作用研究目的:观察原发性肾病综合征(PNS)患儿Th17细胞和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)及其相关因子的在外周血及肾组织中的表达,初步探讨其在儿童PNS发病中的作用。方法:采用流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17细胞和Treg细胞比例;Real-time PCR法检测PBMC中RORC、IL-23p19和Foxp3 mRNA的表达;ELISA分别检测血清中IL-1β、IL-6、IL-10和TGF-β1的水平;免疫组化分析IL-17和IL-1β在PNS肾组织中的表达。结果:单纯型肾病(SNS)、肾炎型肾病(NNS)患儿Th17细胞及RORC、IL-23p19mRNA、IL-1β、IL-6的水平明显高于正常组(均P<0.05),且NNS组患儿以上指标均明显高于SNS组(均P<0.05);SNS、NNS组患儿Treg细胞、Foxp3 mRNA和TGF-β1水平的表达明显低于正常组(均P<0.05),其中两组疾病患儿血清TGF-β1的水平无统计学差异(P>0.05),其余指标NNS组明显低于SNS组(均P<0.05);随着PNS患儿肾脏病理严重程度的增加,IL-17和IL-1β的表达逐渐增加(FSGS>MsPGN>MCNS)。结论:Th17/Treg细胞功能失衡可能在儿童PNS的发病中起到重要作用,其失调程度可能与PNS的临床表现、对激素的敏感性、病理类型及预后有关。第三部分:IL-17对足细胞相关分子和凋亡的影响及其分子机制的研究目的:研究IL-17对足细胞相关分子及其凋亡的影响,并探讨可能的机制。方法:流式细胞仪检测IL-17对足细胞凋亡的影响;Real-time PCR法检测IL-17对足细胞相关分子Nephrin、WT1、Synaptopodin及阴离子蛋白Podocylaxin、凋亡受体Fas和FasL的mRNA的表达;流式细胞仪检测足细胞Fas和FasL蛋白的表达;免疫细胞化学检测足细胞WT1、Caspases8、Caspases3蛋白的表达。结果:IL-17减低足细胞阴离子蛋白Podocylaxin的表达(P<0.05);同时IL-17可促进足细胞凋亡,增加凋亡受体Fas的表达(P<0.01),并且增加其下游分子Caspases8、Caspases3的表达(P<0.01),对Nephrin、WT1、Synaptopodin的表达无影响(P>0.05)。结论:IL-17可能通过抑制足细胞阴离子蛋白Podocylaxin表达,同时引起足细胞凋亡的方式来发挥对肾脏的损伤作用。第四部分:IL-17对系膜细胞功能的影响及其分子机制的研究目的:研究IL-17对系膜细胞增殖及分泌功能的影响,并探讨可能的分子机制。方法: MTT法检测IL-17对系膜细胞增殖的影响;ELISA检测IL-17对系膜细胞分泌IL-1β、TNF-a、MCP-1的影响;免疫细胞化学法检测系膜细胞NF-ΚB的表达。结果:IL-17对系膜细胞的增殖无影响(P>0.05);IL-17可促进系膜细胞分泌IL-1β(P<0.05),且呈浓度时间依赖性;同时IL-17诱导组NF-ΚB的表达高于空白对照组(P<0.05);IL-17对系膜细胞TNF-a、MCP-1的分泌没有影响(P>0.05)。结论:IL-17可能部分通过NF-ΚB途径引起系膜细胞分泌炎症因子IL-1β,加重肾脏局部的炎症状态,导致肾脏损伤。