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目的:
本实验设计研究对人参须超微粉进行了提取分离与部分组成成分的分析;重点观察人参须超微粉提取成分对体外培养的人癌细胞株的抑瘤作用及对荷瘤小鼠的抑瘤作用,探讨其可能的抗肿瘤机制;同时本研究还对人参须超微粉提取成分的毒性进行了观察,测定LD50,并对肝、肾等重要器官功能进行了观察,为深入了解人参须超微粉提取成分的药理学和毒理学作用提供实验数据。
方法:
1、人参须超微粉成分的提取:用热水浸提法进行提取,HPLC的方法测定Rgl的含量,用硫酸一苯酚法、硫酸.蒽酮方法对人参须超微粉成分进行多糖类的含量检测,初步了解其中的部分组成成分。
2、人参须超微粉提取成分对体外培养的人癌细胞的抗癌作用观察:采用体外培养人肝癌细胞SK-HEP-1、人白血病细胞HL-60,人鼻咽癌细胞CNE-2Z分别测试5个浓度的人参须超微粉有效成分对癌细胞的影响,用MTT法检测对三个人癌瘤株的抑瘤率,计算IC50。
3、人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠模型的抗癌作用观察:分别建立荷S180、艾氏腹水癌的荷瘤小鼠模型,分别以不同浓度的人参须超微粉成分灌胃给药,同时设置环磷酰胺阳性对照组,联合用药组、生理盐水对照组,连续给药10天,分别以荷瘤小鼠生存时间、瘤重为指标,观察人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠生命延长率、抑瘤率的影响,同时观察用药过程中人参须超微粉提取成分对重要器官重量的影响。
4、人参须超微粉提取成分抗癌作用机制的研究:通过用流式细胞术、细胞形态学,细胞培养液SOD和NO的变化,观察人参须超微粉提取成分对人鼻咽癌细胞CNE-2Z的作用。
5、人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠抗氧化功能的影响:用比色法检测荷瘤小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷光甘酞过氧化物酶(GST)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、总巯基(-SH)等含量。观察人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠抗氧化功能的影响。
6、人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠的毒性研究:急性毒性实验测定人参须超微粉提取成分的LD50,并观察荷瘤小鼠用药10天后,重要器官指数,肝、肾功能变化。观察人参须超微粉提取成分对荷瘤小鼠的毒性。
结果:
1.人参须超微粉提取成分是淡黄色溶液,放置会有沉淀,振荡或加热可完全溶解,高效液相色谱仪测定含有人参皂苷Rgl(2.48g/L),苯酚一浓硫酸法,硫酸一蒽酮法显示含有多糖类物质(0.74g/L)。
2.人参须超微粉提取成分对体外培养的三种人癌细胞株有明显的抗肿瘤活性:人参须超微粉提取成分对人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞、人肝癌SK-HEP-1细胞、HL-60(人早幼粒白血病)均有抑瘤作用,作用24h的IC50值分别为2.82、5.28、1.55g/L,作用48h的IC50值分别为1.44、2.82、1.83g/L,作用72h的IC50值分别为1.77、2.97、1.45g/L。
3.人参须超微粉提取成分对动物移植瘤具有抑瘤作用:人参须超微粉提取成分表现出对荷S180肉瘤小鼠有抑瘤作用,2、1、0.5、0.25g/kg人参须超微粉提取成分对S180肉瘤的抑瘤率分别是36.1%、39.4%、43.7%,32.4%,0.5g/ml人参须超微粉提取成分没有抑瘤作用;5、2、1、0.5、0.25g/kg人参须超微粉提取成分对荷艾氏腹水癌的小鼠生命延长率分别为24.3%、28.0%、38.3%、33.6%、32.7%。
4.人参须超微粉提取成分对人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞有较强的抑制作用,可使G1期明显减少,而G2和S其相对增多,SOD和NO的含量在细胞培养液中明显上升。
5.人参须超微粉提取成分可以增强荷瘤小鼠抗氧化作用:人参须超微粉提取成分可以增强荷瘤小鼠血清SOD活力和CAT活力,升高血清-SH含量,降低血清MDA含量,特异性升高血清NO含量。对正常小鼠上述指标无明显作用。可以减轻环磷酰胺对荷瘤小鼠的抗氧化功能的损伤。
6.人参须超微粉提取成分毒性研究:急性毒性试验显示人参须超微粉提取成分对昆明种小鼠的毒性较低,在最大溶解度、最大给药容积允许的情况下,未能测出LD50。用药10天后小鼠脾脏、胸腺有不同程度增大,肝功能、肾功能无明显变化。
结论:
1.人参须超微粉主要成分为皂苷类和多糖类物质,每毫升含人参皂苷Rgl2.48mg,多糖类物质0.74 mg。
2.人参须超微粉成分对三种人癌细胞株有明显的抗肿瘤活性,其体外抗肿瘤机制可能与改变细胞周期时相分布,诱导肿瘤细胞凋亡有关。
3.人参须超微粉提取成分对动物移植瘤具有抑瘤作用,其体内抗肿瘤机制可能主要与抗氧化损伤、增强机体免疫功能有关。
4.人参须超微粉提取成分急性毒性低,对肝、肾功能无明显影响,用药期间未见小鼠异常表现。
5.人参须超微粉提取成分可以减轻环磷酰胺的不良反应,但与阳性药环磷酰胺是否具有协同抗肿瘤作用还有待进一步证明。