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肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,每年全世界因此病死亡的患者估计有1250000人。东南亚地区,特别是我国此病的发病率很高。据报道肝癌的发生与HBV和HCV长期感染及黄曲霉毒素摄入增加有关。目前对肝癌患者外科手术的切除率不到20%,多数患者在发现时已有肝内或全身转移;全身化疗因靶向性不高、毒副作用大限制了其应用;经肝动脉插管局部导管化疗亦有其应用的局限性;因此对此疾患尚缺乏有效、满意的治疗方法,基因治疗为肝癌的治疗提供了一条新途径。 本研究利用现代分子细胞生物学技术,对甲胎蛋白(AFP)顺式调控元件进行了改造,筛选出了具有强启动活性的肝癌细胞特异的AFP顺式调控元件,并用之启动胞嘧啶脱氨酶基因(CD基因,一种”自杀”基因)的表达,获得了肝癌细胞特异的靶向性自杀基因治疗,其主要工作和结果有: 1.为了对AFP基因顺式调控元件进行研究,以期筛选出肝癌细胞特异的具有强启动活性的AFP基因调控序列,本文采用基因重组技术,对甲胎蛋白基因顺式调控元件进行了重新组合,得到了六种重组的AFP基因调控序列,其长度分别为:0.2kb(仅含AFP启动子)、0.4kb(含AFP启动子和近端沉寂子)、1.8kb(含AFP启动子和全长沉寂子区,后者其中包括近端沉寂子和远端沉寂子)、2.2kb(含AFP启动子,全长增强子序列,后者其中包括增强子A和增强子B)、2.4kb(含AFP启动子、近端沉寂子和全长增强子)、3.8kb(含AFP启动子、全长沉寂子和全长增强子序列),将之分别克隆于荧光素酶基因的上游,构建了六种受AFP基因顺式作用元件调控的荧光素酶报告基因真核表达质粒,分别命名为pGL-0.2p、pGL-0.4p、pGL-1.8p、pGL-2.2p、pGL-2.4p