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H7N9亚型流感病毒目前在我国呈散发流行态势,且在不断的进化重组,不仅给我国的养禽业带来了巨大的经济损失,也给人类健康造成了巨大的威胁。截止到2016年2月28日,已造成747人感染,297人死亡。本研究对2013年来本实验室分离到的210株H7N9病毒株进行了系统的遗传演化分析和关键分子特征分析。根据时间划分,可将2013年至2016年2月间的H7N9疫情分为四个时期。比较各个基因同源性发现,HA和NA基因的核苷酸同源性分别处在96.9-100%和97.3-100%之间;另外6个内部基因片段PB2、PB1、PA、NP、M和NS的核苷酸同源性分别为95.1-100%、95.3-100%、94.7-100%、93.6-100%、95.2-100%和93.7-100%。根据各基因进化树划分结果,可以将66株全基因组测序的2013分支病毒分为12个基因型。第一波疫情疫情背景较为简单,只有3个基因型;第二波和第三波疫情,背景较为复杂,基因型分别为8个和7个;但主要基因型不变,仍为基因1型。以上结果表明,H7N9病毒表面基因在进化上相对稳定,内部基因的进化率要高于表面基因,这可能是因为H7N9在我国蔓延的过程中不断的与H9N2亚型禽流感病毒发生重组所致。进一步分析发现,所有本实验室2013分支H7N9病毒分离株M2蛋白都有S31N突变,表明对金刚烷胺类药物耐药,所有H7N9病毒仍对神经氨酸酶抑制剂敏感;所有分离到的H7N9病毒裂解位点均只有一个碱性氨基酸,所有PB2蛋白627位为E,均为低致病性特征。耐药毒株的出现以及人传人的可能性,促使人们研发一种有效的疫苗来应对H7N9病毒。本研究利用反向遗传操作技术,将人分离株A/Anhui/1/2013(H7N9)(AH/1)的表面基因HA和NA与冷适应流感病毒株A/AnnArbor/6/60(H2N2)(AAca)的6个内部基因片段重组,构建出一株重组弱毒疫苗株H7N9/AAca。利用多种动物模型评价了该疫苗的安全性、免疫原性和保护效力。在小鼠和雪貂模型上,该疫苗株的毒力显著致弱,小鼠和雪貂感染后,均不表现出临床症状,且病毒的复制局限于上呼吸道并呈低水平复制。在小鼠、豚鼠和雪貂上,H7N9/AAca一免之后能诱导产生一定程度的血凝抑制和中和抗体水平,二免之后诱导产生的血凝抑制和中和抗体水平显著升高并达到了理想的水平。在小鼠、豚鼠和雪貂上,H7N9/AAca一免之后并不能完全阻止病毒复制,但是能够显著降低病毒复制的水平,而且动物不表现出临床症状;二免之后,该疫苗能完全阻止病毒在动物体内的复制。另外,H7N9/AAca一免之后能够完全阻止病毒经飞沫和直接接触感染豚鼠。综上所述,我国流行的H7N9亚型流感病毒目前相对稳定,主要流行基因型为G1型。H7N9/AAca具有良好的安全性和免疫原性,并且具有良好的免疫保护效力。H7N9/AAca弱毒疫苗可以作为储备疫苗以应对目前的H7N9疫情。动物实验结果表明,该疫苗具有在人上进行下一步临床试验的价值。