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目的分析内质网应激对脂肪基质细胞源性星形胶质细胞生长过程中作用。方法1在针吸法美容整形吸脂术获得的脂肪废弃物中分离提取脂肪基质细胞(Adipose-derived stromal cell,ADSC),并将其在体外诱导分化为星形胶质细胞。对ADSC源性星形胶质细胞加入0.5mg/L的衣霉素,观察反应0h、3h、6h、9h、12h的各种反应变化,进行衣霉素实验;同时,取诱导14d时0h、3h、6h、9h、12h五个时间点的细胞作为对照组。2应用免疫细胞化学法检测纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Ⅰ型跨膜蛋白蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、活性转录因子6(activating transcription factor-6,ATF6)、跨膜蛋白抑制物阻抗性酯酶1(Inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、增强子结合蛋白同源蛋白(enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)、C-Jun氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase,JNK)及半胱天冬氨酸蛋白酶12(Cysteme aspartate specific protease12,Caspase12)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Cysteme aspartate specific protease3,Caspase3)的细胞阳性表达状态和细胞形态学改变。3免疫荧光化学法分别检测衣霉素实验组与对照组中的GFAP与GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3的共定位表达情况。4应用Western-blotting法检测两组中GFAP、GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3的表达水平。5流式细胞检测两组的细胞生存状态。6利用透射电子显微镜观察衣霉素实验组不同时间点的细胞超微结构变化特征。结果1 ADSC在体外诱导14d时即可分化为典型的星形胶质细胞,在倒置显微镜下可见加入衣霉素3h时,细胞浆内有少量的空泡样结构;在加入衣霉素6h、9h时,细胞浆内的空泡样数量明显增多;在12h时,细胞胞浆内出现巨大空泡样改变和细胞膜破裂。2免疫细胞化学检测结果中,衣霉素实验组和对照组的GFAP细胞阳性表达率,在各时间点无统计学差异(P>0.05);而GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3的细胞阳性率在各时间点中均为100%;衣霉素实验3h组在细胞胞浆中可见少量空泡样改变,6h组细胞内的空泡数量增多,9h组在细胞膜周围可见巨大空泡结构,12h组可见细胞膜破裂,但细胞核结构完整。3免疫荧光化学法检测结果表明,衣霉素实验组与对照组中GFAP与GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3的阳性共表达率在各时间点中均无统计学差异(P>0.05)。4 Western-blotting结果显示衣霉素实验组与对照组中各时间组的GFAP表达水平均无统计学意义(P>0.05)。衣霉素实验组GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3随着加入衣霉素时间的延长各因子的表达水平逐渐升高,12h组各因子的表达水平均高于其他组(P<0.05);对照组中GRP78、PERK、ATF6、IRE1、CHOP、Caspase12、Caspase3的表达量在各时间点的表达水平无统计学差异(P>0.05)。5细胞流式技术检测显示对照组的细胞存活率、早期及晚期凋亡率在0h、3h、6h、9h、12h组无统计学差异(P>0.05)。衣霉素实验组在0h、3h、6h、9h、12h组细胞存活率明显降低,于第12h时达到最低(P<0.001);早期、晚期细胞凋亡率随着加入衣霉素时间的延长也明显升高,于第12h达到高峰(P<0.001);衣霉素实验组与对照组存活细胞、早期凋亡率、晚期凋亡率在0h无统计学差异(均P>0.05),其余各时间点的存活细胞、早期凋亡率、晚期凋亡率与均有显著差异(均P<0.05)。6透射电子显微镜显示在0h时细胞胞体多呈现椭圆形,细胞膜由于存在较多的突起故细胞膜并不不光滑;粗面内质网围绕在细胞膜周围,没有见到明显的空泡样结构改变;衣霉素实验组3h时细胞质中可见内质网扩张,并可相互缠绕形成的葱皮样层状结构小体;6h时细胞内质网扩张更加明显,在有些葱皮样层状结构小体内出现了部分结构的空泡样改变;9h时细胞的细胞核和细胞膜无明显变化,在细胞质中可见内质网扩张、肿胀进一步加重,葱皮样层状小体结构中可见有巨大空泡;12h细胞的细胞核变化不明显,细胞浆内出现大量的空泡样结构,巨大空泡数量明显增多,可见有些空泡结构的膜与细胞膜相融合并与外界相通。结论在ADSC源性星形胶质细胞的正常生长过程中,存在着以激发未折叠蛋白反应为主的内质网应激反应,而内质网应激在ADSC源性星形胶质细胞的正常生长过程中主要启动未折叠蛋白反应,而对细胞生存具有重要的支持保护作用;在诱导反应中加入0.5mg/L的衣霉素后可以增强内质网应激反应,使得CHOP、Caspase12、Caspase3凋亡因子的表达水平升高,早期、晚期凋亡率明显升高,且内质网应激所介导的细胞凋亡超微结构特征是以内质网相互缠绕形成葱皮样层状结构小体,并随着加入衣霉素时间的延长逐渐空泡化,空泡与细胞膜相融合导致细胞破裂。图24幅;表5个;参82篇。