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背景及目的三阴性乳腺癌在临床上预后较差,常用采用化疗。常用的药物顺铂(DDP)可作为三阴性乳腺癌的解救治疗药物或是术后复发的二线化疗药物。DDP的作用机制是干扰DNA的复制,其靶点在DNA的嘌呤与嘧啶的碱基,具有细胞毒性,有较强的杀肿瘤效果。临床上,顺铂耐药问题日益严重,设法提高原有药物的敏感性,避免药物剂量依赖性增加的不良反应,成为研究的一个热点。Piwil2是癌-睾丸基因家族中的一员,仅表达于睾丸生精细胞,而其他组织均未见表达。近年来发现,Piwil2可修复DNA的损伤,这种现象提示了肿瘤中高表达Piwil2可能是DDP的一种新的耐药机制。近年来,乳酸菌的多种有益功能,包括调节肠道菌群、调节免疫、抗肿瘤等功效被发现,使得关于乳酸菌的研究逐渐成为热点。研究发现,乳酸菌培养上清液可下调Piwil2基因在乳腺癌细胞的表达。综上,由于DDP的杀肿瘤机制与破坏肿瘤的DNA复制有关,Piwil2基因又与DNA修复紧密联系,同时研究发现,沉默宫颈癌细胞Piwil2基因的表达能够增强宫颈癌细胞对DDP的敏感性,而在乳腺癌细胞系中未见文献报道;又有研究发现,乳酸菌培养上清液(LS)可下调MDA-MB-231乳腺癌细胞中Piwil2基因的表达。根据以上依据可提出问题,Piwil2是否与DPP耐药有关,以及LS能否通过下调Piwil2增敏DDP?故本研究目的是验证LS能否下调Piwil2基因,以及探究LS能否增强三阴性乳腺癌细胞对DDP的敏感性。方法采用CCK8试剂盒和Western blotting检测不同剂量DDP(0、1、2、3、4、5μg/ml)对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖的基线情况和Piwil2基因表达水平的影响;瞬时转染Piwil2 siRNA沉默MDA-MB-231细胞中Piwil2基因表达,Western blotting检测siRNA沉默效果,CCK8检测Piwil2基因沉默后,对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响情况;采用CCK8分析和Western blotting检测和不同浓度LS(1%、5%、10%、20%(v/v))与2μg/ml DDP联合不同浓度LS(1%、5%、10%、20%(v/v))处理MDA-MB-231细胞,检测细胞增殖的抑制效应和Piwil2蛋白表达水平的变化。结果当浓度>3μg/ml时DDP可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05),而浓度<2μg/ml时DDP不能有效抑制细胞的增殖;DDP以剂量依赖性的方式上调Piwil2蛋白的表达;siRNA沉默Piwil2的表达能够逆转2μg/ml DDP对细胞增殖的抑制。与MRS组比较,LS以剂量依赖性方式下调Piwil2蛋白的表达但并不会影响细胞的增殖;与单用2μg/ml DDP比较,2μg/ml DDP联合20%LS处理细胞,Piwil2蛋白的表达明显下调且细胞增殖也受到抑制(P<0.05)。结论三阴性乳腺癌细胞中Piwil2的高表达可导致细胞对顺铂敏感性的降低;沉默Piwil2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性;乳酸菌培养上清液可通过下调Piwil2基因的表达增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂的敏感性。研究意义本实验结果可能为三阴性乳腺癌细胞DDP耐药提供一个新的机制,并且这是首次研究乳酸菌培养上清液与增敏DDP的关系,该试验进一步巩固了乳酸菌的“益生菌”地位,同时该疗法可能是一种有效而无毒的、成本也较低廉的生物疗法,进一步研究证实其作用和机制,可为其将来批量生产和临床应用奠定基础,因此,也具有广阔而潜在的应用前景,值得更细致、更深入地研究下去。