CysLTs及其受体在乳腺癌中抗肿瘤作用的研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:BlueDragon8848
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:白三烯(cysteinyl leukotrienes)是花生四烯酸(arachidonic acid)经5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢的一系列产物,包括 leukotrieneB4(LTB4)和半胱氨酰白三烯即 leukotriene C4(LTC4)、leukotriene D4(LTD4)和 leukotriene E4(LTE4)。它们在炎症的发展中发挥着重要的作用。炎性介质半胱氨酰白三烯以及相应的受体半胱氨酰白三烯Ⅰ型受体(CysLT1R)和半胱氨酰白三烯Ⅱ型受体(CysLT2R)与哮喘等变态反应性疾病、脑外伤、脑肿瘤、结肠癌及乳腺癌等密切相关。本实验主要研究在乳腺癌细胞中,CysLT2R的表达与肿瘤的增殖,生存,迁移的相关性,其有望成为防治肿瘤转移的新靶点。方法:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,我们利用流式细胞术,划痕试验及趋化试验测定了 LTC4对细胞周期及对乳腺癌细胞运动作用的影响。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。结果:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系MCF-7细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,结果显示LTC4在浓度为0.1nM、1nM、10nM、20nM、50nM、100nM 时对 MCF-7 细胞的抑制率分别为(6.5±0.03)%,(11 ±0.02)%,(16.6±0.04)%,(35.2±0.04)%,(37.8±0.04)%,(38.5±0.02)%。为了进一步研究LTC4对MCF-7细胞增殖抑制作用的机理,我们利用流式细胞术测定了LTC4对细胞周期的影响。本实验发现处于G0/G1期的细胞随LTC4浓度的提高而明显增加,即LTC4可以显著抑制MCF-7细胞于G0/G1期,使细胞无法越过限制点,因此降低了细胞的增殖。针对LTC4对乳腺癌细胞运动的作用,我们首先通过划痕试验及趋化试验发现,LTC4可以明显延长MCF-7细胞的划痕愈合时间,减少穿膜细胞个数,呈剂量依赖关系。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。针对CysLT2R的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性shRNA,用脂质体介导转染入MCF-7细胞48h,同时设阴性对照组(1条非特异性序列转染)、正常MCF-7对照组(未转染)。Western Blotting检测干扰后CysLT2R蛋白表达水平下调的变化。干扰后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测50nM LTC4作用下细胞株生长能力;应用流式细胞仪检测50nMLTC4作用下细胞周期变化;应用趋化小室检测50nM LTC4作用下MCF-7细胞侵袭运动活性。与正常MCF-7细胞和阴性对照组比较,MCF-7细胞CysLT2R低表达组的细胞生长增殖无明显变化(P>0.05),细胞周期无明显变化。干扰后,MCF-7细胞表现出侵袭活性明显增强(P<0.01)。结论:根据预实验选定的条件,我们进一步通过MTT、Western Blotting、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验、转染等技术,得出以下结论:LTC4可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力,并诱导MCF-7细胞停滞于G0/G1期,其最佳浓度为50nM。低表达CysLT2R对LTC4介导的乳腺癌MCF-7细胞的增殖的抑制作用无影响。低表达CysLT2R可以降低LTC4对乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力的抑制作用,低表达CysLT2R后乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力明显增强。
其他文献
建立重大敏感案件风险评估机制,已经成为一个不容回避的问题。本文结合法院审判实践,从经验总结的角度对敏感案件进行了归纳,并初步探讨了重大敏感案件的风险评估与处置办法
矮小儿童是指身高处于同种族、同年龄、同性别正常健康儿童生长曲线第3百分位数以下,或低于2个标准差的儿童。其病因多样,治疗花费昂贵,激素替代治疗周期长,造成矮小症的儿童
高强度聚焦超声(High intensity focused ultrasound,HIFU)技术作为一种新型无创或微创体外治疗技术,近年来在肿瘤治疗领域取得了突破性进展。但由于治疗靶区温度分布的无创
习近平命运共同体思想的提出基于两个维度:一个是国际维度,从维护人类共同利益出发,旨在处理好国与国之间的关系;另一个是民族维度,从维护中华民族整体利益出发,着眼于各民族
通过对制动系统主观评价方法的研究探讨,建立基于测量的制动感觉指数(BFI)试验评估体系,并对某款车型及其标杆车型进行测量评估.通过对测量评估结果的分析,找出影响制动感觉的"
南京把"名师集群发展"当作重要抓手,以"南京市名师工作站"为依托,全面推动南京市名教师的发展,努力把过去个别名师的"高峰",变成名师群体的"高地",建构起教师发展的良好生态,
作为"权利的宣言书",宪法最明快地保护人权,理当在实践中发挥作用。但即使在宪法审查制度发达的国家,法院在引用宪法上也恪守消极主义立场,尽量回避宪法性判断,在法律层面上
[目的]p33ING1b是一种重要的肿瘤抑制因子,其功能与p53密切相关。在包括胶质瘤在内的多种恶性肿瘤中,其编码基因ING1的突变率极低,但表遗传学和其它机制却经常导致p33ING1b表
目的探究使用风险评估模型在神经外科静脉血栓栓塞症(VTE)防护中的应用价值。方法选取我院2017年8月~2018年8月收治2610例神经外科患者,患者均接受风险评估模型来评估VTE风险