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目的:白三烯(cysteinyl leukotrienes)是花生四烯酸(arachidonic acid)经5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢的一系列产物,包括 leukotrieneB4(LTB4)和半胱氨酰白三烯即 leukotriene C4(LTC4)、leukotriene D4(LTD4)和 leukotriene E4(LTE4)。它们在炎症的发展中发挥着重要的作用。炎性介质半胱氨酰白三烯以及相应的受体半胱氨酰白三烯Ⅰ型受体(CysLT1R)和半胱氨酰白三烯Ⅱ型受体(CysLT2R)与哮喘等变态反应性疾病、脑外伤、脑肿瘤、结肠癌及乳腺癌等密切相关。本实验主要研究在乳腺癌细胞中,CysLT2R的表达与肿瘤的增殖,生存,迁移的相关性,其有望成为防治肿瘤转移的新靶点。方法:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,我们利用流式细胞术,划痕试验及趋化试验测定了 LTC4对细胞周期及对乳腺癌细胞运动作用的影响。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。结果:我们首先通过Western Blotting筛选出CysLT2R表达阳性的乳腺癌细胞系MCF-7细胞系作为模型。首先通过MTT实验初步评价了 LTC4对于MCF-7细胞系存活的影响,结果显示LTC4在浓度为0.1nM、1nM、10nM、20nM、50nM、100nM 时对 MCF-7 细胞的抑制率分别为(6.5±0.03)%,(11 ±0.02)%,(16.6±0.04)%,(35.2±0.04)%,(37.8±0.04)%,(38.5±0.02)%。为了进一步研究LTC4对MCF-7细胞增殖抑制作用的机理,我们利用流式细胞术测定了LTC4对细胞周期的影响。本实验发现处于G0/G1期的细胞随LTC4浓度的提高而明显增加,即LTC4可以显著抑制MCF-7细胞于G0/G1期,使细胞无法越过限制点,因此降低了细胞的增殖。针对LTC4对乳腺癌细胞运动的作用,我们首先通过划痕试验及趋化试验发现,LTC4可以明显延长MCF-7细胞的划痕愈合时间,减少穿膜细胞个数,呈剂量依赖关系。观察MCF-7细胞低表达半胱氨酰白三烯II型受体(CysLT2R)对半胱氨酰白三烯(LTC4)介导的细胞生长、迁移能力、细胞周期等生物学行为的影响。针对CysLT2R的已知cDNA序列,设计并体外转录合成4条特异性shRNA,用脂质体介导转染入MCF-7细胞48h,同时设阴性对照组(1条非特异性序列转染)、正常MCF-7对照组(未转染)。Western Blotting检测干扰后CysLT2R蛋白表达水平下调的变化。干扰后,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测50nM LTC4作用下细胞株生长能力;应用流式细胞仪检测50nMLTC4作用下细胞周期变化;应用趋化小室检测50nM LTC4作用下MCF-7细胞侵袭运动活性。与正常MCF-7细胞和阴性对照组比较,MCF-7细胞CysLT2R低表达组的细胞生长增殖无明显变化(P>0.05),细胞周期无明显变化。干扰后,MCF-7细胞表现出侵袭活性明显增强(P<0.01)。结论:根据预实验选定的条件,我们进一步通过MTT、Western Blotting、流式细胞术、Transwell实验、划痕实验、转染等技术,得出以下结论:LTC4可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力,并诱导MCF-7细胞停滞于G0/G1期,其最佳浓度为50nM。低表达CysLT2R对LTC4介导的乳腺癌MCF-7细胞的增殖的抑制作用无影响。低表达CysLT2R可以降低LTC4对乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力的抑制作用,低表达CysLT2R后乳腺癌MCF-7细胞的迁移及运动能力明显增强。