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随着功能基因组时代的到来，结直肠癌发生的早期检测及基因差异表达谱分析方面的进展非常迅猛，如何寻求一个有效的途径来获得生物标记物以及开发抗结直肠癌的药物越来越成为研究的热点。 目前认为结直肠癌的发生大部分通过腺瘤-腺癌顺序发展，所以获得腺瘤差异表达基因对研究癌早期的发生机制及防治尤为重要。我们通过SSH方法根据一个病例的正常结肠粘膜，腺瘤及腺癌建立了三个差减文库：腺瘤相对于正常粘膜的差异片段文库(A-N)，腺癌相对于正常粘膜的差异片段文库(T-N)和腺癌相对于腺瘤的差异片段文库(T-A)。 通过对1999年获得的未知基因的序列分析，进行电子克隆，EST拼接，开放阅读框架预测，再经蛋白序列比较，发现其中的一个未知基因，即2001年从炎症性肠病文库中发现的RegⅣ。在对A-N文库中的109个克隆的测序分析后，我们得到了包括癌相关基因在内的各类基因，涉及9个假设蛋白，33个未知的候选新基因，其中RegⅣ被筛选了13次。通过对A-N差减文库的反向Northern分析，31／40(75.2％)个克隆出现明显上调，3／40(7.5％)个较正常下调，6个与正常基本一致。其中上调的基因包括RegⅣ。在候选的差异片段中，有2个差异片段与Alu序列有关。 我们用半定量RT-PCR、Northern杂交、原位杂交等方法检测RegⅣ在结直肠腺瘤及结直肠癌中的表达。收集29例新鲜的结直肠肿瘤，男性17例，女性12浙江大学博士论文 Rq IV，一个在结直肠肿口中高表达的新基因例，年龄42－sl岁，平均60．7且士14．23岁。其中门例来自结肠，16例来自直肠。包括27例结直肠癌，12例结直肠腺瘤，有 10例结直肠癌同时伴有腺瘤。 对 Reg YV的半定量 RT－PCR检测，以p－actin，G3PDH为内对照，22／27（sl．5％）的腺癌出现了上调，5例出现 T下调。在 12例腺瘤中，12liZ0o）出现上调，在10例癌伴有腺瘤的病例中，3例正常粘膜－腺瘤－癌持续上调，7例在结直肠癌表达较腺瘤低门％人 Reg IV在腺瘤、腺癌中的表达水平较配对的正常粘膜为高o均小于 0．of，配对的秩和检删。 对正常粘膜Reg IV表达的检测发现，Reg IV的表达在结肠中较直肠为高p—0刀5，秩和捡哟。在 4例低分化癌病例中均出现 Reg IV上调，其中 2例 T／N比（经标化）值大于 10。12例转移病例全部出现 RCg IV的上调。但根据配对的 X’检验，低分化组与非低分化组，转移组与非转移组在 neg w的上调率这一指标上并未见有显著性差异厌＞O．05卜 在 RT－PCR的基础上进行 Northern blot检测（包括 11例已做 RT－PCR检刚，证实 T RT－PCR的结果。结果显示，在 15例结直肠肿瘤病例中，与正常粘膜相比，7侣例腺瘤 Reg IV水平上调Z if／15例腺癌表达增加Z在8例结直肠癌伴有腺瘤的病例中，腺癌中的表达有3例较腺瘤表达降低，3例呈正常粘膜－腺瘤－腺癌增加趋势。 通过原位杂交检测 Reg IV的表达，共检测了 73例病例，年龄32七3岁，平均值 58．83土12．80。检测有意义的结果 62例。请两位病理科医生协助，采用双盲法判断结果。结果发现；74％＊）伴轻中度不典型增生的腺瘤出现 Reg IV的高表达ZI／％（12八）的腺瘤伴重度不典型增生、癌变病的中的癌变区出现ResIV的高表达（Pe．002，配对的秩和检制。在同一例腺瘤中，表达水平与异型增生程度呈正相关。在 29例原发的结直肠癌中，ZI例（7％）出现 RCg IV表达增加厌ed刀00，配对的秩和检剜。 4。。d；浙江大学博士论文 Rq！V，一个在结直肠肿回中高表达的新基因 上述结果表明 Reg IV在 A－N文库中被频繁筛选到，说明这是一个有显著差异表达的基m。Northern Blot，RT－PCR和原位杂交方法证明 Reg IV在结直肠腺瘤和腺癌中的表达较相应正常粘膜明显增高。aeg ry的表达在正常粘膜、腺瘤和腺瘤癌变过程中呈进行性增加，且其表达与腺瘤上皮的不典型增生程度呈正相关。 Reg家族有 16个成员，它们在肝、胰腺、肠上皮细胞的增殖、分化中起作用。大量研究证明 Reg家族咸员在糖尿病、炎症、创伤与肿瘤尤其在消化系统肿瘤中发挥重要作用。Reg家族成员的异常表达或异位表达与胃、肠、肝、胆等器官组织的恶性肿瘤有关，它们的上调可能是这些肿瘤发生的预警指标。这些研究开始显示再生基因家族的潜在应用价值。本研究通过 Reg家族新成员 Reg IV与结直肠肿瘤关系的系列研究证明 Reg IV的表达异常与结直肠肿瘤的发生发展有关。通过该研究可以得出以下结论：（）通过％H建立文库，经克隆测序和生物信息学分析是筛选差异表达基固简便和有效的方法 Z（z）neg ry是一个在结直肠肿瘤中高表达的新基因。可能是一个预警腺瘤癌变的生物学标志。neg w在结直肠肿瘤中高表达的分子机制有持进一步阐明2（3）A－N文库的测序和生物信息学分析结果对结直肠肿瘤分子机