番茄SlASA1基因的克隆及功能分析

来源 :重庆大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jeffery2010
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
生长素是植物生长激素中最为重要的一种激素,它通过调节早期生长素响应基因的表达,从而控制植物生长发育的多个阶段,如:顶端优势、向性生长、侧根的形成、微管的分化、胚胎发育等。番茄(Solanum lycopersicum)是研究果实发育与成熟调控的理想模式作物,具有基因组小、自花授粉易于纯合、生长周期短(45-100天)、在温室内可周年生产、具有成熟的遗传转化体系等特点。由此本研究利用番茄作为材料来研究生长素基础的生理生化机制,并进一步探究生长素对于果实发育过程的调控机理。ASA1基因编码合成一种限速酶元件(Anthranilate synthase component I),可以促进生长素前体邻氨基苯甲酸的合成,同时在拟南芥中已被证实,ASA1基因是生长素与乙烯互作的重要节点,在植物生长发育过程中通过影响生长素的合成,发挥重要的作用。本研究以番茄为研究材料,克隆了SlASA1基因,分析了它的特异性表达模式,以及对不同激素刺激,外界刺激的响应,通过分离它的启动子,构建启动子GUS表达载体,转化番茄进一步确定它在番茄中的表达情况。同时,通过构建超表达和干扰表达载体,转化番茄,得到转基因植株观察了在不同表达量情况下植株的生理和形态变化。从而初步明确了SlASA1介导的生长素含量变化对植物生长发育的影响。本研究主要取得以下研究成果:1)参照拟南芥ASA1基因序列(NM001203302.1),在番茄基因数据库SGN(http://solgenomics.net/)进行比对,得到番茄ASA1基因序列(SGN-U573188),序列全长1929bp,具有完整的开放阅读框1347bp,编码448个氨基酸。通过启动子预测分析,分离出SlASA1基因上游2123bp序列作为其启动子,对启动子功能元件分析发现,启动子中含有大量的乙烯和生长素响应元件,负责种子发育和蛋白储存的调控基因结合域,以及部分的赤霉素和脱落酸响应元件。2)组织表达模式分析发现,SlASA1基因在花蕾和果实中的表达量最高,在花中的表达其次,在根茎叶中的表达相对较低。进一步的对其花特异性表达进行分析,发现其在雌蕊中表达量最高,在雄蕊,花瓣及萼片中的表达较低。揭示了SlASA1基因可能在花果及种子形成过程中发挥着重要的作用。3)将克隆的SlASA1基因,构建到以CaMV35S为启动子的表达载体pLP100上,成功得到pLP100-35s-ASA1超表达载体。选取基因中间约400bp大小的片段,采取干扰载体构建方法,将其正反双向构建到pCambia-HP1干扰载体上,成功得到pCambia-HP1-ASAi干扰载体。将扩增得到的ASA1启动子序列,构建到pLP100表达载体上,成功得到pLP100-ProASA1-GUS载体。4)通过农杆菌介导的番茄遗传转化方法,将pLP100-35s-ASA1、pCambia-HP1-ASAi、pLP100-ProASA1-GUS成功转化至番茄,获得相应的转基因植株,并进行了鉴定。通过定量PCR的方法鉴定ASA1基因在对应植株的表达情况。5)通过石蜡切片,扫描电镜,鉴定了SlASA1基因对植物微管分化,表皮毛形成的影响,发现SlASA1基因的过量表达促进植株木质部细胞的分裂,同时通过促进表皮细胞的分裂提高了植株表皮毛的数量,并且该基因的过量表达会降低叶片表面气孔的数量,这对于提高植株的逆境抗性有着积极的作用。通过植株形态学表型的鉴定发现,SlASA1基因的过量表达会使种子的干重降低,饱满度差,而抑制表达则会形成无籽果实,说明它在种子形成过程中发挥重要作用。6)在SlASA1超表达株系中,通过对相关乙烯、生长素通路相关基因的检测,对比野生型植株相应基因的表达,发现SlASA1基因的过量表达可以明显抑制乙烯信号通路正向调控因子的表达,同时可以提高生长素通路正向调控因子的表达,从而说明了该基因在乙烯、生长素通路中的重要作用。结果表明:SlASA1基因是一个重要的生长素合成功能基因,通过响应乙烯信号介导调控生长素信号通路,正向地调控了植株生长素的合成、微管的形成、抗逆性和种子的发育等过程。
其他文献
新时期维护稳定工作任务艰巨,一些群体性事件规模越来越大,参与人数越来越多,组织程度越来越高。集体上访、越级上访、跨区域串联上访的现象频频出现,甚至出现聚众围堵冲击机关、
南疆(新疆天山以南)是我国土壤荒漠化最严重、沙漠流动明显、荒漠植被较少的区域之一。研究该区域荒漠植物在防沙固沙、种群更新能力以及防护林建设方面所起的作用,对维护沙漠及绿洲边缘生态系统稳定、物种多样性保护及环境修复等具有重要的科学意义及实际应用价值。本论文以塔克拉玛干沙漠西南部阿图什格达良的荒漠为研究区域,通过采用野外和室内的控制性试验,对该区域荒漠植物的固沙能力进行评估;群落优势物种泡果白刺(Ni
介绍了潜在危害性指数法的基本原理和计算公式,通过某大型化工企业的实例,提出了应用的要求,并筛选出了企业的9项主要的环境监测因子。
近年来,特色小镇的建设在世界各国大大小小的城市中不断被推进,以此来带动地方的旅游业发展。在我国,特色小镇的发展仍然处于初级阶段,仍有很多领域需要不断探索。如何理顺出
随着无线技术的发展,对微波器件提出了宽带、小型化和易集成的需求。耦合器作为最基本的微波元件之一,在微波测量、混频器、移相器、天馈系统等中都有着广泛的应用。本文基于基片集成波导(substrate integrated waveguide,SIW)技术,对半模基片集成脊波导(half-mode substrate integrated ridged waveguide,HMSIRW)宽边耦合90°定
上海花园饭店污水采用接触曝气法处理,在正常负荷时,所有测试指标匀可达上海市的排放标准;但超负荷时,氨氮数据有时偏高,在实践过程中,采取对该套装置进行科学管理,及时掌握饭店原客
采用水解酸化-生物接触氧化相结合的处理工艺处理合成橡胶废水,结果表明,在进水CODcr和BOD5分别656mg/L和286mg/L的情况下,出水平均值分别为82mg/L和28.6mg/L平均去除率分别达到87.5%和90%,水解酸化可将民橡胶废水的可生化性同0.44提
职业教育在科教兴国与人才强国战略中发挥着重要作用。我国政府和社会不断强调职业教育,增加对它的财政投入。但是,我国职业教育中存在职业教育法律与制度供给不足的严重问题
当下房地产行业进入了一个特殊时期,竞争尤为激烈。鉴于房地产行业属于国家产业中的一个重要支柱,政府加强了对房地产行业的控制力度。在目前特殊的情况下,如何获得良好的经
工业化学品的日益增多和广泛使用,给环境带来了很大的压力。工业化学品的风险评价问题,对环境管理至为重要,国家环保局及国内的工业企业正在讨论有关化学品毒性的控制问题。该文