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杨梅素广泛存在于自然界植物中,具有多种药理活性,是多种先导药物的前体,也可以直接作为药物。在植物中杨梅素含量较低,提取分离工艺复杂,难度大,造成市场上杨梅素产品供应不足,价格高。研究表明显齿蛇葡萄中二氢杨梅素含量高达30%以上,资源丰富。本文依据二氢杨梅素与杨梅素结构相似的特点,通过化学转化法半合成杨梅素的工艺研究。主要研究内容如下:(1)建立了杨梅素的UV法和HPLC检测方法;UV法测定杨梅素的检测波长为375nm,标准曲线方程为C=14.328A-0.1871,r=0.9998,杨梅素的质量浓度在3.52~10.56μg/m L范围内与吸光度呈良好线性关系。该方法精密度良好,方法稳定,可重复性高。HPLC法检测条件为:Hypersil BDS C18柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(24:76),流速为1.0 m L/min,柱温25℃,检测波长为375 nm。标准曲线方程为C=1.49×10-5S-2.40471,r=0.9997,杨梅素在40.0~120.0μg/m L范围内线性相关良好,方法稳定,精密度较高,重复性良好。(2)采用AFO法,进行了以二氢杨梅素为原料半合成杨梅素的工艺研究;二氢杨梅素在碱性条件下开环生成查尔酮、Algar-Flynn-Oyamada(AFO)反应、HCl溶液调节p H等反应步骤合成了杨梅素。采用单因素实验对反应参数进行优化,在最佳反应条件[二氢杨梅素0.520 g,H2O(30 m L)为溶剂,依次加入15%H2O2溶液0.68 m L和16%Na OH溶液5.5 m L,于35℃反应24 h]下,3次验证试验杨梅素平均收率为16.21%,RSD=1.78%。(3)采用吡啶热回流法,研究了以二氢杨梅素为原料半合成杨梅素的工艺研究;二氢杨梅素用吡啶溶液溶解,进行加热回流反应,合成得到杨梅素。采用响应面设计法优化了杨梅素合成工艺参数,其最优反应参数为:吡啶体积分数为66.6%,反应温度为90.36℃,料液比为20.88:1(mg:m L),反应20 h,杨梅素收率预测值为76.48%。验证实验实际测得的平均收率为76.63%(n=4),RSD=1.39%。(4)对合成的杨梅素粗品进行了脱色工艺研究;在单因素试验的基础上,以杨梅素脱色率和保留率为指标,选取脱色温度、活性炭用量、p H和脱色时间,进行4因素3水平正交试验设计优化脱色工艺。最佳脱色工艺条件为:A3B3C1D1,即在45℃下,加入0.08 g的活性炭,调节p H为3.0,脱色10 min。因素影响主次顺序为:活性炭用量>脱色温度>p H>脱色时间。(5)研究了杨梅素的结晶工艺研究;以甲醇和乙醇作为结晶溶剂,进行重结晶纯化后,杨梅素纯度分别为99.21%和98.89%,产率为48.82%和50.26%。以甲醇和乙醇进行梯度浓度法结晶,经过重结晶纯化后,纯度分别达到99.26%和98.89%,产率为69.0%和71.0%。(6)合成杨梅素的结构表征;采用核磁共振氢谱(1H-NMR)、核磁共振碳谱(13C-NMR)、红外光谱(IR)、紫外光谱(UV)和高效液相色谱(HPLC)等方法对合成杨梅素的结构进行了结构确认。(7)建立了过氧化值的UV检测方法,本方法与国标法无显著差别;对杨梅素的清除DPPH·能力和食用油抗氧化能力进行了比较研究。结果显示合成的杨梅素产品和杨梅素对照品抗氧化能力和清除DPPH·能力接近。