诺氟沙星影响单壁碳纳米管对人体肺细胞的毒性效应以及对其致毒机制的研究

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由于独一无二的一维中空纳米结构以及优异的电学、力学和热学等特性,碳纳米管(Carbon nanotubes, CNTs)可以广泛应用在复合材料、电学和纳米医学等领域。随着碳纳米管产品的生产、使用的大幅度增长,专业人员和公众接触碳纳米管的几率明显增大,其中,CNTs还可能与环境中的一些有机污染物形成复合污染,导致其健康可能会受到比碳纳米管更大的威胁。肺部作为碳纳米管进入人体后主要沉积器官之一,CNTs对其毒性效应及其响应机制是目前毒理研究的热点。细胞是生物体的基本的结构和功能单位,离体培养时具有试验周期短、灵敏性高、培养条件易于掌控等特点,并且利于从分子角度阐释致毒机制。因此,本研究选取人体肺细胞(A549)作为受试细胞,探究在诺氟沙星(Norfloxacin,NOR)的影响下,单壁碳纳米管(single-walled carbon nanotube,SWCNT)对其毒性效应以及其响应机制。主要研究结果如下:(1)随着暴露时间的增长,SWCNT对A549细胞的毒性效应在24h时变化最明显;暴露于SWCNT24h后,随着浓度逐渐增加,A549细胞存活率逐渐降低,其半数抑制浓度(IC50)为65mg/L。因此,进一步的细胞毒性实验选取SWCNT浓度为65mg/L。(2)浓度在0-40mg/L范围内的NOR对A549细胞没有毒性效应。65mg/L的SWCNT对40mg/L的NOR的吸附在24h时达到平衡。平衡后,NOR溶液中的SWCNT对A549细胞的毒性效应降低。(3)通过添加内吞抑制剂,在激光共聚焦荧光显微镜(LCFM)下观察到A549细胞对SWCNT的摄取量明显降低,表明内吞作用可能是SWCNT的跨膜方式之一。当其进入细胞后,利用透射电子显微镜(TEM)发现SWCNT单独作用细胞时,其主要分布在溶酶体和细胞质中;SWCNT和NOR共同作用细胞时,其主要分布在细胞质中。(4)SWCNT可以诱导A549细胞产生大量ROS,短时间内使细胞内H2O2、OH的含量显著增大,产生氧化胁迫,刺激A549细胞产生反馈调节,提高了CAT、SOD酶的活性,从而加强对过量自由基的清除能力,增强了细胞对外环境的防御能力。但是,随着时间的增长, ROS会继续积累,引起细胞脂质过氧化,从而使细胞膜稳定性降低,膜结构受损,导致乳酸脱氢酶的释放。(5)当SWCNT与NOR共同作用细胞时,与SWCNT单独作用相比,诱导A549细胞产生的ROS的量减少,MDA的含量降低,乳酸脱氢酶的释放量下降,从而对细胞的整体毒性减弱,这可能是其毒性较小的主要机制之一。
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