鸦葱精制总黄酮的制备及其保肝、抗乙肝病毒药理活性的研究

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鸦葱(Scorzonera austriaca Willd.),菊科鸦葱属多年生草本植物,分布于西北,东北地区。全草入药,具有清热解毒,活血消肿的功效。外用治疔疮,痈疽,毒蛇咬伤,蚊虫叮咬,乳腺炎等。目的:从鸦葱全草中提取纯化得到精制总黄酮并研究其保护肝脏和抗乙肝病毒的作用,为研制保护肝脏和抗乙肝病毒药物提供实验数据。方法:(1)采用乙醇浸泡法得到鸦葱总黄酮的提取液,用D101大孔树脂色谱柱分离纯化提取液得到粗制黄酮,将粗制黄酮上样D4020大孔树脂色谱柱进一步纯化得到精制总黄酮;(2)ICR小鼠进行灌胃鸦葱总黄酮7d后末次2h前腹腔注射0.1%CCl4诱导急性化学性肝损伤;ICR小鼠尾静脉注射卡介苗2.5mg·kg-1,灌胃鸦葱总黄酮12d后尾静脉注射脂多糖10μg/只诱导急性免疫性肝损伤。两批动物分别采集血液检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量并做肝脏病理切片;(3)原位胶原酶消化法提取分离Wistar大鼠肝细胞,以30mmol·L-1的CCl4诱导肝细胞损伤,鸦葱黄酮溶液干预培养细胞4h后检测上清培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和肝细胞丙二醛(MDA)含量;(4)培养HepG2.2.15细胞,研究鸦葱总黄酮对其表面抗原HBsAg、E抗原HBeAg和乙肝病毒DNA的影响。结果:(1)D4020大孔树脂对鸦葱粗制总黄酮表现出良好的吸附和解析,是分离纯化鸦葱精制总黄酮的理想树脂。(2)鸦葱精制总黄酮能够显著减轻CCl4诱导的小鼠化学性肝损伤和卡介苗+脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤,降低血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)含量(P<0.05,P<0.01)。(3)CCl4诱导大鼠肝脏细胞损伤的最佳浓度为30mmol·L-1,损伤时间4h;鸦葱总黄酮高中低三组均能明显降低细胞上清培养液中AST、ALT、LDH、NO及细胞中MDA含量(P<0.05,P<0.01),同时鸦葱总黄酮能显著抑制SOD活力的降低(P<0.05,P<0.01)。(4)鸦葱总黄酮高中低三组剂量均能抑制HepG2.2.15细胞培养液中表面抗原HBsAg和E抗原HBeAg的含量,显著降低培养液中的乙肝病毒DNA的数量(P<0.05,P<0.01)。以上研究表明鸦葱总黄酮具有良好的保肝和抗乙肝病毒作用,为开发和利用鸦葱资源、研制保肝和抗乙肝病毒新药提供了实验数据。
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