论文部分内容阅读
淀粉是稻米的最主要成分,包括直链淀粉和支链淀粉,其比例是决定稻米食味品质最重要的因素。研究表明:在淀粉生物合成过程中,决定淀粉组成和比例的关键酶有3种,分别是结合型淀粉合成酶(GBSS)、可溶性淀粉合成酶(SSS)和淀粉分支酶(RBE);GBSS控制直链淀粉合成、由Waxy基因编码、SSS、RBE协同控制支链淀粉合成,分别由SSS基因和rbe基因编码。本项目分别将SSS基因和rbe1基因导入籼型杂交稻恢复系明恢86和保持系珍汕97B,并研究其遗传表达及其在杂交稻配组上的利用。主要结果如下: 1、建立了籼稻恢复系明恢86和保持系珍汕97B的根农杆菌介导的遗传转化体系。以水稻花后15天的幼胚为材料,诱导胚性愈伤,以3~6代的胚性愈伤为转化受体材料,经4天预培养,高浓度农杆菌(OD6002.0)侵染30分钟,共培养3天后进行选择筛选,约一个月后长出抗性愈伤,抗性愈伤经进一步筛选,存活的愈伤转入分化培养基中,20~30天分化成小苗; 2、将SSS基因、rbe1基因导入明恢86和珍汕97B,共获得转基因克隆361个。其中:转rbe1明恢86有60个克隆、转SSS明恢86有101个克隆、转rbe1珍汕97B有30个克隆、转SSS珍汕97B有28个克隆; 3、转基因水稻后代中,约25%的转化克隆呈现单基因分离,其余为高比率分离或偏分离;分子杂交结果证明:异常分离的克隆为多拷贝整合;外源基因一旦稳定整合在水稻基因组中,其后代能够稳定遗传: 4、RT-PCR检测结果表明,转rbe1基因纯合株系灌浆期mRNA转录水平增强;转基因水稻灌浆期胚乳SSS酶活性、RBE酶活性增强,进一步验证外源基因在水稻胚乳中的特异表达; 5、研究筛选出直链淀粉含量显著降低的转基因株系,从转rbe1基因的明恢86中,筛选出7个直链淀粉含量显著降低的纯合株系,降幅最大的株系为86RF38-3-1-1直链淀粉为8.8%,比对照的16.8%相对下降了31.2%;