卵形鲳鲹趋化因子CCL4(TroCCL4)参与机体抗菌免疫反应

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CC类趋化因子作为趋化因子的亚族,在先天免疫系统中起重要作用。迄今为止,CC趋化因子已经在多种鱼类中被研究并证实具有先天免疫作用。然而,在其它鱼类中CC趋化因子的研究仍显不足,本研究中,我们以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)为研究对象,对其趋化因子CCL4(TroCCL4)的序列特征、表达调控规律及功能进行分析。结果显示,TroCCL4含有294 bp的开放阅读框,编码98个氨基酸。TroCCL4与人和其它硬骨鱼的CCL4所编码的氨基酸序列具有31.11%-78.35%的相似性,并且具有四个保守的半胱氨酸残基。系统进化分析结果显示,TroCCL4属于CC趋化因子的MIP亚组。在健康的卵形鲳鲹中,TroCCL4的表达量在免疫器官中最丰富,经Edwardsiella tarda感染后,TroCCL4的表达量在48 h内随感染时间的增加而显著上调。然后,我们构建了原核重组表达质粒并表达了原核重组的TroCCL4蛋白(rTroCCL4),进而对rTroCCL4的功能进行研究,结果表明该蛋白能诱导外周血白细胞(PBL)的迁移和头肾淋巴细胞(HKL)的细胞增殖;此外,rTroCCL4能显著抑制迟缓爱德华氏菌和大肠杆菌的生长,表明其具有一定的抗菌功能。体内实验的结果表明,在卵形鲳鲹中,当TroCCL4过表达时,能显著提高巨噬细胞的活性;同时能显著上调免疫相关基因白细胞介素1-β(IL-1β),白细胞介素15(IL15),干扰素诱导的Mx蛋白(Mx),肿瘤坏死因子α(TNFα),补体C3和主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰα和Ⅱα的表达水平,并显著减少感染卵形鲳鲹的细菌数量;当干扰TroCCL4的表达时,会显著增加感染卵形鲳鲹的细菌数量。终上所述,本研究表明了 TroCCL4具有趋化外周血白细胞、增殖淋巴细胞、提高巨噬细胞活性的功能,并能通过提高宿主免疫力来增强卵形鲳鲹抵御细菌感染的能力。
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