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前言 胆囊胆固醇结石是一种常见的消化系统疾病。目前的流行病学研究表明,胆固醇结石与家族遗传有关。胆石的形成可能源于复杂的环境作用和尚不明了的多基因作用。胆囊胆固醇结石病表现为胆汁中胆固醇的内环境的失衡,即胆固醇在胆汁中溶解的生理-生化平衡被打乱。胆囊胆固醇结石的病理生理缺陷表现为:胆囊中胆汁的胆固醇非生理性过饱和。其原因可能为(1)肝脏胆固醇的高分泌;(2)分泌进入胆汁的胆盐和磷脂的降低。有研究表明MRP2与胆盐的分泌有关。本实验旨在通过应用RT-PCR的方法对胆囊胆固醇结石病人与正常人MRP2基因表达的对比来探讨MRP2基因在胆囊胆固醇结石形成中的作用。 实验材料 标本来源:实验组为2002年-2003年胆囊胆固醇结石患者的肝组织14例,收集的样本均为在胆囊胆固醇患者的胆囊手术中行肝穿刺而得。对照组为外伤性肝破裂病人破碎肝组织或行部分肝切除术而得(经术中探察或病理证实无胆囊胆固醇结石)。待测标本均置于-70℃冰箱保存。 实验仪器:PCR扩增仪;低温离心机;匀浆机;电泳仪;无菌操作台;高压锅;恒温箱;紫外分光光度计;各种微量加样器及枪头;烤箱。 实验试剂:Trizol(invitrogen公司),反转录试剂盒(promega公司),TagDNA聚合酶(华美公司),dNTP(华美公司),DNAmarker(华美公司)等。 实验方法 1.提取组织总RNA 2.逆转录RNA 3.PCR反应及鉴定 4.mRNA表达的半定量分析结果 胆囊胆固醇结石患者的肝组织中MRfZ mRNA的表达比正常人的肝组织中MRPZ mRNA的表达降低,两组比较差异具有显著意义(P<0.01)。讨论 MB工佗基因是结合ATP的多药耐药蛋白(MRP)转运子基因家族的一员,大量研究表明MRpZ(和它的小鼠同源基因m几〕2)大部分在肝细胞上并严格分布在肝细胞膜的胆管侧。MRPZ转运二价胆盐,本研究通过对胆固醇结石病人及正常人的肝细胞的MRPZ的mRNA表达的半定量分析发现,胆固醇结石病人的肝细胞的MRfZ mRNA的表达低于正常人群,提示MRPZ在胆固醇结石形成中起到了一定的作用。由于MR卫2是胆盐的跨膜转运子,因此如果人的肝细胞中MRI卫mRNA的表达降低将导致MRPZ的减少,进而导致胆盐的分泌将减少。而胆盐在胆汁中与磷脂、胆固醇构成微胶粒,增加胆固醇在胆汁中的溶解,防止胆固醇结晶而形成结石,因此胆汁中胆盐的减少将降低胆固醇的溶解,有利于胆固醇结石的形成。胆固醇结石病人中肝细胞的MRPZ mRNA减少的原因我认为可能有以下几个原因:(一)MRPZ基因的变异。(二)MRPZ基因调控的异常。由于本研究的样本较少,因此尚需更多的研究来明确MRPZ基因与胆固醇结石的关系。结论一、胆囊胆固醇病人MR刃2 mRNA的表达降低。二、MRfZ基因在胆囊胆固醇结石的过程中起作用。