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目的：研究饱和脂肪酸(Saturated fatty acids, SFAs)软脂酸(Palmitate, PA)对血管内皮细胞(Vascular endothelial cells)Toll样受体4mRNA及其蛋白表达的影响,探讨软脂酸刺激下TLR4对内皮细胞分泌IL-6和肿瘤坏死因子α的影响,探讨代谢综合征(metabolic syndrome, MS)患者内皮细胞胰岛素抵抗的发病机制。方法：培养猪髋动脉内皮细胞(Pig Iliac Endothelial Cells, PIECs),将培养的细胞分为实验组和对照组。在实验组加入含不同浓度(100μmol/l、200μmol/l)软脂酸的培养基,在对照组加入不含软脂酸的培养基进行培养。①各组细胞在相同条件下分别培养6h、12h、24h,采用实时荧光定PCR(quantitative real-time PCR)检测PIECs TLR4mRNA表达,并通过此实验确定软脂酸诱导TLR4表达的最适浓度和最适作用时间；②各组细胞在相同条件下培养12h,蛋白印迹法(western blotting)检测PIECs TLR4蛋白表达；③各组细胞在相同条件下培养12h,流式细胞术(flow cytometry)检测PIECs细胞表面TLR4蛋白水平；④选用200μmol/1软脂酸孵育PIECs,用酶联免疫吸附试验分别检测软脂酸刺激前及刺激6h、12h、24h后细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达情况。结果：1.实时荧光定量PCR检测结果：在100pM软脂酸组PIECs在孵育6h后TLR4mRNA表达开始增加,但与对照组比较差异无显著性(P>0.05)；在12h后PIECs TLR4mRNA的表达达最高峰,与6h及对照组比较差异有显著性(P<0.05)；在24h时,TLR4mRNA表达比12h的表达降低(P<0.05),但较对照组及6h差异有显著性(P<0.05)。200gM软脂酸组与100μM软脂酸组规律基本相同,但PIECs在孵育6h后TLR4mRNA表达开始增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。200μM软脂酸组均较同时凤点100μM软脂酸组TLR4mRNA表达增加,差异有显著性(P<0.05)。各时间点对照组之间TLR4mRNA表达无显著性(P>0.05)。2.蛋白印迹法检测结果：100μM、200μM软脂酸分别刺激PIECs12小时后TLR4蛋白表达显著升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；而100μM软脂酸组TLR4蛋白的表达又低于200μM软脂酸组,两组比较,差异具显著性(P<0.05)。3.流式细胞术检测结果：软脂酸组PIECs在100μM、200μM软脂酸分别孵育12h后细胞膜TLR4蛋白水平较对照组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)；200μM软脂酸组TLR4蛋白的表达又高于100μM软脂酸组,两组比较,差异具显著性(P<0.05)。4. ELISA检测结果：与对照组相比,软脂酸组PIECs在200μM软脂酸孵育6h后,细胞上清液中IL-6和TNF-α分泌量即显著增加(P<0.05)。在孵育12h后,IL-6和TNF-α的水平随孵育时间的延长而呈上升趋势,在24h最高(P<0.05)。结论：1.软脂酸可使猪髋动脉内皮细胞TLR4蛋白及mRNA的表达上调。在本实验条件下,内皮细胞TLR4mRNA的表达水平在12h后呈下降趋势,可能与软脂酸的长期作用使细胞毒性作用增强,进一步导致细胞内蛋白质及DNA合成障碍有关。2.软脂酸在诱导血管内皮细胞TLR4蛋白表达上调的同时,使内皮细胞细胞膜TLR4蛋白水平显著增加,可能与活化TLR4炎症信号通路协同作用,共同导致内皮细胞胰岛素抵抗。3.软脂酸促进内皮细胞表达TLR4及分泌IL-6和TNF-α, IL-6和TNF-α产生的时间高峰滞后于TLR4表达上调的时间高峰,表明IL-6和TNF-α的产生与TLR4的表达上调有关。