【摘 要】
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本文利用染色体荧光原位杂交的方法对银鲫进行了研究,其主要内容包括以下四个方面:
1.根据限制性内切酶HindIII酶切银鲫和彩鲫基因组DNA所得到酶切片段的序列,设计一对特异
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本文利用染色体荧光原位杂交的方法对银鲫进行了研究,其主要内容包括以下四个方面:
1.根据限制性内切酶HindIII酶切银鲫和彩鲫基因组DNA所得到酶切片段的序列,设计一对特异引物,从基因组中得到5S rDNA序列,长度为340bp。同时对银鲫的单个染色体进行了显微分离后,进行连续的两轮DOP-PCR扩增,其产物大小从几十bp到5kb不等,成弥散型条带。通过比较5S rDNA和单个染色体DOP-PCR产物与银鲫和彩鲫及红鲤的有丝分裂中期染色体杂交结果表明,银鲫应该为三倍体。同时还分析了5S rDNA在银鲫和彩鲫的精子间期核中的分布特点。
2.比较45S rDNA在银鲫、红鲤、彩鲫以及银鲫复合四倍体染色体上的杂交信号的数目和位点,证明复合四倍体银鲫的基因组是起源于银鲫和红鲤基因组。同时基因组原位杂交的结果进一步证明了人工复合四倍体银鲫的基因组既保留了银鲫全部的三个染色体组,又整合了鲤鱼的单个染色体组,为人工复合四倍体银鲫的基因组构成提供了直接的遗传证据。染色体银染的结果也证实了45SrDNA和核仁组织区NORs的相关性。
3.通过PCR从银鲫D系基因组中分离得到的Cot-1DNA和端粒DNA,标记后与五个不同品系(A,A+,D,DA-D,L品系)银鲫的有丝分裂中期染色体进行原位杂交结果表明,每对同源染色体上均显示出了特定的荧光杂交带型。荧光原位杂交结果证实了Cot-1DNA与5S rDNA二者作为重复序列应具有一致的染色体位置的特征,表明基于Cot-1 DNA荧光原位杂交的核型分析技术,优于目前普遍的只采用rDNA荧光原位杂交的核型分析方法。结合端粒DNA,Cot-1DNA荧光原位杂交带型以及染色体的形态,本文作者首次分析银鲫A,D两个品系的荧光染色体核型。并与其可能的祖先种红鲤和彩鲫的荧光原位杂交结果相比较,在银鲫各品系中均有9-10个小染色体上的序列全部或大部分为重复序列,其中的6个超数染色体早已被证明是由于“异精效应”从父本精子中得到的染色体片段,而另外三个亚中部着丝粒染色体在其可能的祖先种红鲤和彩鲫中是没有的。这可能是染色体重排的结果,也可能是异染色质扩增的结果。同时,通过单个染色体显微分离和DOP-PCR方法从这些特殊的染色体中得到了一些重复序列。而其中的一个特异重复序列作为探针与银鲫A系有丝分裂中期染色体进行原位杂交,其结果与Cot-1 DNA荧光原位杂交结果是一致的。
4.将转铁蛋白基因定位在银鲫有丝分裂中期的一对亚中部着丝粒染色体的长臂上,信号点距着丝粒的百分距离约为26.5%。同时对三个银鲫基因组BAC克隆进行的荧光原位杂交结果显示.BAC克隆W112-A1在多个不同类型的染色体上都能检测到杂交位点。另两个BAC克隆W112-A6,W112-A10只在三个染色体上有杂交信号。转铁蛋白基因染色体定位的特点是三倍体银鲫基因组二倍体化的又一个证据。
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