【摘 要】
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论文在综述国内外各种微流控芯片酶反应分析系统的基础上,对比多种微流控芯片酶反应分析系统的特点,选定固定酶的苯乙烯整体柱芯片分析系统,随后对该分析系统进行了应用研究
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论文在综述国内外各种微流控芯片酶反应分析系统的基础上,对比多种微流控芯片酶反应分析系统的特点,选定固定酶的苯乙烯整体柱芯片分析系统,随后对该分析系统进行了应用研究。首先,以苯乙烯功能单体、二乙烯基苯交联剂、无水乙醇致孔剂及偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,采用紫外引发法,制备了反相聚苯乙烯整体柱材料;为了满足其用于酶固定的要求,采用硫酸磺化改性获得了阳离子聚苯乙烯整体柱材料。用扫描电镜法、红外光谱法等手段表征了该材料的形貌结构和特性,并在溶液过柱流速小于1.5mL/min时,测得长为10mm,直径为1mm的改性聚苯乙烯整体柱对L-Tyr样品的最大吸附量约为3.4mg,柱容量约为0.43mg/mm3,并具有良好的机械稳定性。GOD酶在聚苯乙烯介质材料上进行固定,在规格为长20mm、直径1mm聚苯乙烯整体柱上,用对苯醌紫外检测的方法测定,当使用的游离酶为10U时,GOD酶的固定量约为7U,,酶的固定效率可达70%。在微流控芯片管路中,实现了聚苯乙烯整体柱的原位聚合和磺化改性,在改性后的聚苯乙烯整体柱上固定了HRP酶,确定了HRP酶在酶浓度5μg/mL和过柱速度0.2mL/min时,固定效果良好,以此构建了固定酶的苯乙烯整体柱微反应芯片分析系统。将该微反应芯片分析系统与化学发光检测方式结合,建立了固定酶整体柱微反应芯片-化学发光检测方法。化学发光优化实验发现样品过片流速为0.2mL/min、发光试剂与样品的体积比为1:1时,可以达到最佳的化学发光检测效果。用抗坏血酸(Vc)和左旋多巴两种样品对该方法进行了验证,获得良好的检测效果。该分析方法,通过固定不同的酶或抗体,就能用于对应酶底物或抗原的检测,具有广泛的适用性。
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