拟南芥AtPLC5特异性抗体的制备及启动子活性的初步分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:sqqmyquanqs
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磷酸肌醇特异性磷脂酶C广泛存在于真核生物中,是真核生物细胞信号转导途径的重要组分之一。PI-PLC可特异的水解4,5-二磷酸肌醇(简称PIP2),产生两个第二信使,即1,4,5-三磷酸肌醇和1,2-二酰基甘油。PI-PLC在植物对于诸如渗透压的改变、生长素及ABA的处理、光和重力的变化、病原菌的侵染等胞外刺激的响应,及授粉等发育过程的信号转导中发挥重要的作用。Ca2+是植物PI-PLC的重要调节因子。模式植物拟南芥基因组中,存在9个推测的PI-PLC基因(其中At3g55940和At2g40116两个基因到目前为止,尚未发现cDNA序列)。已报道的PI-PLC有AtPLC1S、AtPLC1F、AtPLC2和AtPLC6。在拟南芥第V染色体的一段13kb大小的DNA序列中,存在一个与AtPLC1S和AtPLC6顺序排列的基因序列,推测其编码PI-PLC。本实验室克隆到了这个基因的全长cDNA,并命名为AtPLC5。推测的氨基酸序列分析结果表明,其具有典型的植物PI-PLC的结构,既具有1个EF-Hand,1个X和Y结构域及C2结构域。结构上类似与动物细胞中的PI-PLCξ异型体。选择保守性较差的AtPLC5N端序列融合Flag-tag后原核表达作为抗原,通过免疫兔子,获得抗AtPLC5的多克隆抗体。该抗体只识别AtPLC5而不识别拟南芥中的其他6个PI-PLC异型体的原核表达产物。证明我们获得了AtPLC5的特异性多克隆抗体。用两相法分离质膜后,以该抗体进行的免疫印迹结果表明,AtPLC5存在于质膜组织和可溶性胞质中。即在拟南芥细胞中,AtPLC5以质膜结合蛋白和胞质可溶性蛋白两种形式存在。在AtPLC5启动子后融合GUS报告基因,得到转基因植株后的GUS染色发现,AtPLC5启动子驱动的GUS在叶柄、花药、柱头和荚端表达;经ABA等胁迫诱导后在根部和叶脉中表达。
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本文通过对荣华二采区10
期刊
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