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RTT103在酵母生长中发挥很重要的作用。双敲除RTT103和CTK1,酵母致死;双敲除RTT103和CTK2,酵母生长减慢;双敲除RTT103和REF2,酵母不能存活。本文对酵母RTT103的人类同源基因p15RS和CREPT的功能进行研究。本论文书写分成了两个部分,第一部分是对p15RS调控Wnt/β-catenin信号通路的机理研究;第二部分是对CREPT调控人类肿瘤生长的机制研究。p15RS是一个p15INK4b相关的基因,抑制细胞周期G1/S转换和Cyclin D1的表达,而Cyclin D1是β-catenin/TCF4/LEF1下游的靶基因。因此本文第一部分对p15RS调控Wnt/β-catenin信号通路进行研究。免疫共沉淀实验证明p15RS和β-catenin或TCF4存在相互作用,且它们的相互作用是由p15RS的RPR结构域,β-catenin的第407-533位氨基酸和TCF4的第1-200位氨基酸介导的。免疫荧光实验显示,p15RS和β-catenin或TCF4在细胞核里存在很明显的共定位。一系列细胞学实验证明,p15RS抑制性调节Wnt/β-catenin信号通路,抑制细胞增殖和Wnt靶基因的表达。进一步的研究发现,p15RS调节Wnt信号通路的机制是通过抑制β-catenin和TCF4复合物的形成及其结合到Cyclin D1的启动子上,而对TCF4结合DNA的能力没有影响。本文第二部分探索了CREPT的生物学功能。免疫组化实验发现,CREPT在8种人类肿瘤组织中高表达,组织芯片结合临床资料发现,CREPT的含量与癌症患者预后生存时间存在很好的相关性。细胞学实验发现,过量表达CREPT促进细胞生长,克隆形成增多,肿瘤生长加快和细胞周期G1/S转换加速。染色质免疫共沉淀实验显示,CREPT结合在Cyclin D1的启动子和poly A前面的区域。进一步的3C实验证明CREPT调控Cyclin D1的转录是通过形成染色质环,即:当RNA聚合酶II (RNAP II)到达Cyclin D1的启动子区,CREPT和RNAP II相互作用,促进Cyclin D1的转录;当RNAP II到达Cyclin D1的poly A前面的区域,CREPT和RNAP II相互作用,阻止RNAP II继续前进,通过染色质环让RNAP II又回到Cyclin D1的启动子区,从而加速Cyclin D1的转录。该部分的研究不仅揭示了CREPT调控细胞周期,促进肿瘤生长的机制,还为肿瘤的基因诊断和针对性基因治疗提供参考。