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目的:
表皮生长因子受体EGFR(Epidemal growth factor receptor)在许多类型的实体肿瘤如头颈部鳞癌、宫颈癌、乳腺癌、消化道肿瘤、卵巢癌及膀胱癌等呈过度表达。EGFR的表达在肿瘤细胞衍生、凋亡、去分化、新血管形成、侵袭及转移等过程发挥着重要的作用,与肿瘤放疗敏感性及预后密切相关。西妥昔单抗(Cetuximab、Erhitux、IMC-C225)是一种人/鼠嵌合型IgG1单克隆抗体,可以竞争性地与表皮生长因子受体EGFR结合,阻断其通路的激活,从而抑制细胞增殖、恶变、侵袭及转移。在很多研究中,西妥昔单抗不但显示出很强的抗瘤活性,而且与放疗联合时可明显提高其疗效。本研究通过表皮生长因子受体抑制剂西妥昔单抗作用于鼻咽癌细胞CNE-2Z,观察其对细胞的放疗增敏作用及其相关机制。
方法:
选用人鼻咽癌细胞系CNE-2Z为研究对象。免疫细胞化学法检测细胞表面的EGFR表达,MTT法及成克隆分析法测定西妥昔单抗对CNE-2Z的细胞增殖抑制作用及放疗增敏作用,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。
结果:
1、免疫细胞化学法检测CNE-2Z细胞表面EGFR表达状态为+++。
2、MTT法检测不同浓度西妥昔单抗作用于CNE-2Z细胞48小时后细胞增殖抑制率,计算出IC50=24.85ug/mL,以1/5的IC50即5ug/L为实验加药浓度。
3、西妥昔单抗联合射线作用于CNE-2Z抑制了细胞的增殖。MTT结果显示,单照射组、单药组、照射前、后给药组细胞的增殖抑制率分别为16.18%、19.36%、29.98%、26.27%,照射联合用药组明显高于单照组和单药组(P<0.05)。而照射前、后给药组无明显差异(P=0.501)。
4、成克隆分析法测细胞的放射生物学参数。结果显示,照射联合给予西妥昔单抗,CNE-2Z细胞DO值,Dq值,SF2值均较单照射组降低(P<0.05),D0值、Dq值比(SERD0、SERDq)均大于1。结果证实,西妥昔单抗具有放疗增敏作用。照射前给药和照射后给药组比较,后者的D0、Dq、SF2、SER均较前者略增高,但两者无显著差异(P>0.05)。
5、细胞周期检测发现,单用药组G1期细胞比例明显增加;单照射组细胞大多处于G2+M期;放疗前和放疗后加药组以G1期、G2+M期为主,S期细胞比例减少,两者各周期分布比例间无统计学差异(P>0.05)。
结论:
西妥昔单抗对CNE-2Z有明显的增殖抑制作用,并呈剂量依赖性。西妥昔单抗能增加CNE-2Z放疗敏感性,其机制可能与抑制细胞生长、改变细胞周期分布有关。