车前草是江西省吉安市特色中药材,长期以来遭受穗枯病(plantain head blight)的严重危害。目前,在车前草穗枯病防治中面临的最大问题是车前草品种单一且高度感病。传统抗病育种是培育抗病品种的一条重要途径,但由于至今对车前草穗枯病的抗性遗传性状及其相关基础知识了解不够,因此,采用传统育种方法来选育车前草抗穗枯病品种存在较大的难度。分子育种技术作为现代育种技术之一,寄希望能解决车前草穗枯病抗性育种问题。本文采用cDNA-AFLP技术开展野生车前草抗穗枯病菌差异表达基因筛选及其功能鉴定研究,目的是为进一步克隆全长抗病相关基因,继而开展抗病基因育种研究奠定良好基础。在实验中,用车前草穗枯病菌(Diaporthe angelicae)强致病力菌株DA-8对高抗穗枯病的野生车前草种质PPZ14进行挑战接种,在接种后12h、24h、48h、72h和96h分别对接种株和未接种株取样,提取各样品的mRNA,以此mRNA为模板,以Oligo(dT)为引物合成各样品的cDNA;采用核酸内切酶Mse I和EcoR I对cDNA进行双酶切,酶切片段经接头连接后用预扩增引物进行预扩增,随后将预扩增产物进行选择性扩增,结果从64对选择性扩增引物中筛选到31对多态性较好的扩增引物;对31对选择性扩增引物作进一步的筛选实验,结果筛选到4对能较好显示差异表达基因的引物。将此4对引物对各时间段差异表达基因进行筛选,结果在接种后的12h、24h、48h、72h和96h样品中各筛选到40、62、44、28、30差异表达基因片段。对各差异表达基因目前正在进行克隆测序和功能鉴定研究,已获得一个差异表达基因的核苷酸序列,序列长度为116nt,推测能编码37个氨基酸,但奇怪的是此序列在中间处被一个非编码密码子所间断,该密码子的出现可能由Taq酶掺入错误碱基所致。功能分析表明,该基因很可能属于一种转录调控因子。