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学习和记忆是脑的最高机能——智能的重要组成部分。学习指个体对新知识的获得过程,而记忆是指对这种获得知识的编码、巩固、检索,或者说记忆是刺激消失后在心理上保持下来的代表原刺激的讯息。睡眠和学习记忆能力关系密切。而睡眠障碍已成为困扰当代人群日常工作、学习和生活的一种常见因素。因此,本课题以睡眠剥夺复制学习记忆障碍模型,观察加味四逆散调控模型动物学习记忆能力的神经生物学机制。上篇理论研究对中医经典文献、历代医家专著和期刊文献涉及学习记忆的资料,进行整理、分析、归纳和总结。从五藏神与学习记忆的关系入手研究,侧重论述了心、肝和肾在学习与记忆过程中的作用。心神、肝魂和肾志调控学习记忆过程,依赖于心主血脉、肝主疏泄和肾藏精的功能或物质基础。在心神“任物“的主宰下,肝魂和肾志神相互作用、相互影响调控学习的获得、记忆的储存和再现过程。睡眠一觉醒周期受五藏神的调控,而睡眠剥夺主要影响了心主神明、肝藏魂和肾藏志的功能,导致学习记忆能力障碍。下篇实验研究实验研究一SD大鼠一般状况及学习记忆成绩的评价方法：应用Y迷宫评价各组大鼠学习记忆能力的状况,并对各组一般状况进行观察和记录。结果：①体重变化：在SD72h和168h时点,与模型组比较,四逆散组和加味四逆散组大鼠体重减轻量有统计学差异(p<0.05)；与其余四组体重量呈现减少的表现相反,对照组大鼠体重量呈现增加的表现。②血清酶学变化：模型组大鼠血清LDH较对照组明显增多(p<0.05)。加味四逆散组血清LDH较模型组明显降低(p<0.01)。③SD168h后,大鼠Y迷宫正确百分率较造模前明显下降(p<0.05),与对照组比较也明显下降(p<0.05)。在三个中药复方中,加味四逆散能明显增加模型大鼠迷宫成绩(p<0.05),而四逆散、生慧汤对模型大鼠迷宫成绩无明显变化。结论：①SD导致大鼠学习记忆能力下降,并出现躯体疲劳；②加味四逆能明显改善SD致学习记忆能力障碍,而四逆散和生慧汤对SD致学习记忆能力障碍改变不明显实验研究二SD大鼠行为学变化及加味四逆散对其调控作用方法：应用旷场和高架十字迷宫评价各组大鼠精神行为的变化。结果：①OFT变化：在水平活动上,各组大鼠SD168h后,模型组在总穿格次数上明显高于对照组(p<0.01)；模型组在中央格停留时间明显高于对照组(p<0.01)；模型组在中央格停留次数明显高于对照组(p<0.05),而生慧汤组和加味四逆散组明显低于模型组(p<0.05)。在垂直活动上,模型组站立次数明显高于对照组(p<0.01),加味四逆散组明显低于模型组(p<0.01)；生慧汤组也低于模型组(p<0.05)。②EPM变化：在水平活动上,模型组在进入开放臂时间百分比上明显高于对照组(p<0.05),而加味四逆散组明显低于模型组(p<0.05)。在垂直活动上,模型组向下探究时间明显高于对照组(p<0.05)。结论：①SD大鼠减少了焦虑样行为和增强了探索行为。②加味四逆散能显著改善SD所致大鼠焦虑样行为减少和探索行为增强的异常变化。生慧汤和四逆散仅能部分改善SD所致大鼠焦虑样行为减少和探索行为增强的异常变化。实验研究三SD大鼠PFC和海马CA3区突触界面结构的变化及加味四逆散对其调节作用方法：采用透射电镜技术,观察各组大鼠PFC和海马CA3区神经元突触界面超微结构的变化。结果：①PFC神经元突触界面超微结构的变化：与对照组比较,模型组大鼠PFC神经元突触间隙明显变宽(P<0.05),PSD厚度明显变薄(P<0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC神经元、PSD厚度明显变厚(P<0.05)。②海马CA3区神经元突触界面超微结构的变化：与对照组比较,模型组大鼠海马CA3区神经元突触PSD厚度明显变薄(P<0.05),突触间隙厚度变宽(P<0.05)。与模型组比较,四逆散组和生慧汤组大鼠海马CA3区神经元突触间隙厚度明显变窄(P<0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠海马CA3区神经元PSD厚度明显增厚(P<0.05),突触间隙厚度明显变窄(P<0.05)。结论：①加味四逆散能增加SD大鼠PFC和海马CA3区神经元突触PSD厚度、调整海马CA3区突触间隙宽度,影响突触结构可塑性,增加突触传递效能。②四逆散和生慧汤仅能调整海马CA3区神经元突触间隙宽度,对突触传递效能影响低于加味四逆散组。实验研究四SD大鼠PFC和海马CA3区NMDA和EphB2受体蛋白质表达的变化及加味四逆散对其调节作用方法：采用Western blot技术,观察各组大鼠PFC和海马CA3区NMDA和EphB2受体蛋白质表达的变化。结果：①NMDA受体NR2A亚基蛋白质表达变化：与对照组比较,SD168h后大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显减少(p<0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显增多(p<0.05)。与四逆散组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体MNR2A亚基蛋白质的表达明显增多(p<0.05)。②NMDA受体NR2B亚基蛋白质表达变化：与对照组比较,SD168h后,大鼠PFC和海马CA3区NMDA受体NR2B蛋白质的表达明显减少(p<0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC和海马CA3区NMDA受体NR2B蛋白质的表达均明显增多(p<0.05)。与四逆散组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B蛋白质的表达均明显增多(p<0.05)。③NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质表达变化：与对照组比较,SD168h后大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质的表达明显减少(p<0.05)。与模型组比较,加味四逆散组大鼠PFC脑区NMDA受体NR2B (Tyr1472)蛋白质的表达均明显增多(p<0.05)。各组大鼠海马CA3区NMDA受体NR2B (Y1472)蛋白质的表达比较均无明显变化。④EphB2受体蛋白质表达变化：与对照组比较,SD168h后,大鼠PFC脑区EphB2受体蛋白质的表达明显减少(p<0.05)。与模型组比较,四逆散组、生慧汤组、加味四逆散组大鼠PFC脑区EphB2受体蛋白质的表达表达均明显增加(p<0.05)。各组大鼠海马CA3区EphB2受体蛋白质的表达比较均无明显变化。结论：①加味四逆散能上调SD大鼠PFC区的学习记忆相关受体NR2B、NR2B (Tyr1472)和EphB2蛋白质的表达；并上调海马CA3区NR2B受体蛋白质的表达。②四逆散和生慧汤仅能上调SD大鼠PFC区的EphB2蛋白质的表达。实验研究五SD大鼠海马CA1区NMDA和EphB2受体基因表达的变化及加味四逆散对其调节作用方法：采用实时荧光定量PCR技术,观察各组大鼠海马CA1区中枢神经受体基因表达的变化。结果：与对照组比较,模型组大鼠海马CA1区NMDA受体NR2B亚基和EphB2的mRNA表达明显减少(p<0.01), NMDA受体NR2A基因表达无明显变化。与模型组比较,加味四逆散组能明显增加大鼠海马CA1区NMDA受体NR2A, NR2B和EphB2的mRNA表达(p<0.01)。与模型组比较,生慧汤组能明显增加大鼠海马CA1区NMDA受体NR2A的mRNA表达(p<0.01)。结论：加味四逆散能明显上调SD大鼠海马CA1区学习记忆相关中枢神经受体基因表达的变化,而四逆散和生慧汤对其影响不明显。小结对研究数据进行分析,可以总结为四点：一是加味四逆散(疏肝补肾养心法)对SD大鼠从行为学、形态学、基因表达、蛋白质表达等多个层面进行调控,能明显改善SD大鼠学习记忆成绩。四逆散(疏肝法)和生慧汤(补肾养心法)仅影响SD大鼠在形态学、蛋白质表达等部分层面的部分靶点,对SD大鼠学习记忆成绩改变无统计学上的影响。二是PFC、海马CA1和CA3亚区相比较来说,加味四逆散对SD大鼠PFC区影响最为明显,特别是对PFC区学习记忆相关受体蛋白质表达的变化。三是加味四逆散(疏肝补肾养心法)改善SD大鼠学习记忆能力障碍,与增加SD大鼠PFC和海马CA3神经元PSD厚度,增加PFC区NMDA受体NR2B亚基和NR2B (Y1472)蛋白质的表达,上调海马CA3区NMDA受体NR2B亚基和EphB2受体蛋白质的表达,上调海马CA1区NR2B和EphB2的mRNA的表达有关。四是疏肝法和补肾养心法都参与了学习记忆过程的调控,是调控学习记忆过程的重要参与者,但不能独立发挥作用。