恶性肿瘤是仅次于心血管疾病的第二大死因,而肝癌是居于我国第二位死因的恶性肿瘤,其死亡率在农村仅次于胃癌,在城市仅次于肺癌。现有的肝癌治疗方法临床疗效并不理想,研究开发抗肝癌药物是我国面临的重要抗癌任务。目前抗肿瘤药物的开发已由单一的细胞毒类药物向多元化发展。中药作为我国的传统药物,与其它药物相比,在细胞凋亡诱导、细胞通讯和免疫调节这三方面都有优势和潜力,不少中药已在临床或实验室证实能直接诱导肿瘤细胞凋亡和提高荷瘤机体的免疫力。江苏地产白首乌是一传统中药,为萝摩科植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight的块根,味甘、苦,性微温,具有补肝肾、益精血等多种药理功效,现代研究表明白首乌有防瘤抗瘤、清除自由基、增强免疫等功能。C21甾体苷是白首乌中发现数量最多的也是最主要的活性成分,研究表明白首乌甾体苷在体外对多种癌细胞有杀伤作用,在体内对艾氏腹水癌(EAC)、人肺癌细胞(Lewis)及肉瘤S180等都有明显的抑制作用。本实验用移植性肝癌实体瘤(Heps)为模型,观察了C21甾体苷抑制肝癌细胞增殖和免疫调节作用,主要内容如下:1对Heps的抑制作用和对免疫器官指数的影响为了研究C21甾体苷类对肝癌机体的整体影响,我们构建了小鼠移植性Heps模型,分别给予不同剂量的C21甾苷灌胃,末次给药24小时后处死小鼠,立即解剖剥离肿瘤组织及胸腺、脾脏,分别称重,计算抑瘤率和胸腺、脾脏指数,并对肿瘤组织进行病理观察。结果发现,白首乌C21甾苷三个剂量均能抑制Heps生长,与模型组比较差异显著(P<0.01),三次重复实验抑瘤率均在30%以上,显示了稳定的抗肿瘤活性,并呈一定的剂量-效应关系;常规病理形态学观察,白首乌各剂量组肝癌组织有明显坏死区,伴有粒细胞浸润;另外,C21甾体苷能降低小鼠荷瘤后异常增高的脾指数,升高胸腺指数;实验结果初步说明,白首乌C21甾体苷有抑制肝癌生长和免疫增强作用。2诱导肝癌细胞凋亡及相关机制凋亡是细胞的程序性死亡,在肿瘤的发生、发展和消亡过程中起着重要作用,利用药物诱导肿瘤细胞凋亡很有希望成为治疗肿瘤的一条新途径,将为包括肝癌在内的肿瘤治疗提供一个新思路。在第一部分抑制肝癌生长和对肿瘤组织病理切片观察的基础上,本实验再进一步对肿瘤组织进行电镜观察,采用免疫荧光测定肝癌细胞凋亡和细胞毒作用,并用免疫组化染色检测凋亡抑制基因蛋白bcl-2的表达。结果显示用药组电镜下肝癌细胞有凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;AO/EB双荧光染色证实了其有细胞毒作用,能诱导肝癌细胞凋亡;免疫组化结果显示,肝癌组织中凋亡抑制基因蛋白bcl-2高表达,与模型组比较白首乌C21甾苷能明显降低bcl-2的表达(P<0.01)。实验结果提示抑制过表达的bcl-2从而诱导肿瘤细胞凋亡可能是其抗肿瘤机制之一。3对腹腔巨噬细胞免疫功能的影响单核巨噬细胞是体内非常重要的免疫细胞,诱导和调节机体非特异性和特异性免疫应答,在肿瘤免疫方面也起重要作用。本实验用腹腔巨噬细胞吞噬中性红检测非特异性吞噬能力;用LPS激活腹腔巨噬细胞,以硝酸还原酶法检测其分泌NO的量、双抗体夹心ABC-ELISA法检测其诱生肿瘤坏死因子-α能力。用药后,荷瘤机体的非特异性免疫功能增强,与模型组比较,白首乌C21甾体苷各剂量组的巨噬细胞吞噬中性红能力增强、分泌NO和TNF-α的量均进一步增加,高于正常水平;但与腹腔巨噬细胞吞噬功能结果不一致的是高剂量组分泌NO的量略低于中剂量组。结果显示白首乌C21甾体苷能增强肝癌小鼠的巨噬细胞免疫功能。4对脾淋巴细胞免疫功能的影响肿瘤患者都有不同程度的免疫功能低下状态,而脾脏是机体重要的免疫器官。本实验用MTT法检测脾脏的T、B淋巴细胞增殖,双抗体夹心ABC-ELISA法检测脾淋巴细胞诱生白细胞介素-2情况,结果显示荷瘤小鼠的T、B细胞增殖力下降,IL-2分泌降低,而C21甾体苷可显著增强T、B淋巴细胞体外增殖力,使其接近正常水平,各剂量组小鼠脾淋巴细胞诱生IL-2水平也明显提高,与正常组、模型组比较均有显著差异,表明C21甾体苷能提高脾淋巴细胞的免疫功能。