【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是引起全球性动物流行病猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的病原体。近年来我国PRRSV的毒株流行情况变得越来越复杂,基因组变异加快,毒株出现重组突变,相继出现变异毒株HP-PRRSV、NADC30-Like和GM2-Like毒株。这类毒株中出现了很多不能在Marc-145细胞上传代的毒株,而且这些毒株的核苷酸与现有疫苗有很大差异,现有疫苗不能提供很好的保护。目前PR
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（31272564）； 国家生猪产业技术体系专项资金（CARS-35）；
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猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是引起全球性动物流行病猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的病原体。近年来我国PRRSV的毒株流行情况变得越来越复杂,基因组变异加快,毒株出现重组突变,相继出现变异毒株HP-PRRSV、NADC30-Like和GM2-Like毒株。这类毒株中出现了很多不能在Marc-145细胞上传代的毒株,而且这些毒株的核苷酸与现有疫苗有很大差异,现有疫苗不能提供很好的保护。目前PRRSV的研究和疫苗的研发主要基于Marc-145细胞,针对不能于Marc-145细胞传代毒株的研究对于预防控制该类PRRSV的流行具有重要的意义。对2018年华南地区PRRS的流行情况进行研究,发现华南地区PRRS流行仍以HP-PRRSV为主。对其中7株毒株进行全基因组测序发现不感染Marc-145细胞的毒株在三种亚型中普遍存在。本实验室分离的PRRSV GM2-Like 1138株可以感染原代猪肺巨噬细胞（PAM）而不能感染传代细胞系非洲绿猴肾上皮细胞（Marc-145细胞）,而本实验室现有的HPPRRSV JXA1株和NADC30-like LYNA株既可以感染PAM细胞以及Marc-145细胞,Marc-145细胞被广泛应用于PRRSV研究和疫苗的创制。对实验室分离的PRRSV毒株序列以及Gen Bank中已知细胞适应性的毒株的GP2a-GP3区域的氨基酸进行分析,发现GP2a第98位氨基酸主要为亮氨酸和苯丙氨酸两种类型,不能感染Marc-145细胞的毒株GP2a第98位氨基酸都为苯丙氨酸,当98位氨基酸为亮氨酸时均可感染PAM和Marc-145细胞,推断GP2a第98位氨基酸可能为影响PRRSV细胞适应性的关键位点。为验证GP2a第98位氨基酸是否为影响PRRSV感染Marc-145的关键性位点,以本实验室构建pok JXA1和pok LYNA感染性克隆为骨架,突变GP2a 98位亮氨酸为苯丙氨酸,成功拯救出r JXA1-98Phe和r LYNA-98Phe病毒。r JXA1-98Phe和r LYNA-98Phe能感染PAM而不能感染Marc-145细胞,而其亲本毒JXA1株和HNLY株对两种细胞均能感染,表明GP2a第98位氨基酸是决定PRRSV对Marc-145细胞适应性的关键位点。以本实验室分离的不能感染Marc-145细胞的毒株1138为骨架,构建感染性克隆pok1138,并突变GP2a第98位氨基酸为亮氨酸,成功拯救出r1138-98Leu。r1138-98Leu能感染PAM却不能感染Marc-145细胞,表明仍有其他氨基酸位点决定PRRSV对Marc-145细胞适应性。本研究通过序列分析以及对毒株该位点突变验证,确定了GP2a第98位氨基酸是引起PRRSV感染Marc-145细胞的关键位点,该位点的改变对PRRSV在PAM细胞上的增殖速度无显著影响。本研究为PRRSV在不同细胞的细胞适应性研究提供了新的研究思路和方法。
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