头孢菌素C吸附余液中去乙酰头孢菌素C的分离纯化

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去乙酰头孢菌素C(Deacetyl Cephalosporin C,DCPC)是头孢菌素C(CephalosporinC,CPC)的发酵生产中一种主要副产物,其结构与头孢菌素C类似,其含量约占头孢菌素C的20%。现有CPC生产工艺中,DCPC存在于CPC的吸附余液中,直接被排放到自然环境中,这种方式导致了环境污染和环境中抗生素的残留。研究发现DCPC可以通过水解侧链后转化为头孢菌素类药物的中间体,3-去乙酰基-7-氨基-头孢烯酸(D-7ACA),该中间体在生产头孢呋辛、头孢西丁等的过程中具有收率高、质量优的特点。因此开发从CPC吸附余液中回收DCPC的工艺具有重要的社会和经济效益。本研究中首先建立了一种新的去乙酰头孢菌素C的反相高效液相色谱法。在其液相条件下DCPC与CPC的分离度R>9,与去乙酰头孢菌素C内酯的分离度R>3,其峰纯度>98%,色谱标准曲线的线性方程为Y=23176000X+178263.16,线性相关系数R2=0.9995,在0.05~0.9g.L-1范围内线性关系良好。该方法实现了DCPC与噻嗪,CPC及去乙酰头孢菌素C内酯(DCPCc)的基线分离,为后续定量分析提供了可靠的根据。其次对吸附余液中DCPC的稳定性进行了考查,发现DCPC在酸性条件下降解较快,尤其是当吸附余液的pH小于3时其降解更加的迅速,降解产物为去乙酰头孢菌素C内酯。DCPC所在溶液的温度对DCPC的降解影响很大,温度越高降解速率越快,该分离纯化工艺需要在低温下进行。在此基础上开发出了沉淀除杂,吸附层析与离子交换层析联用从头孢菌素C吸附余液中回收去乙酰头孢菌素C的新方法。碱沉淀可以显著去除CPC吸附余液中的杂质成分。并通过静态吸附实验对树脂进行了筛选,发现大孔吸附树脂A和离子交换树脂B具有较好的分离纯化DCPC的效果。两种树脂的工作方式均为吸附方式,吸附树脂的上样pH为2.7,离子交换树脂为4.0,离子交换树脂主要除掉的是DCPC内酯。通过除杂及两步树脂的吸附洗脱,DCPC的回收率可以达到约74%,纯度可达到91%以上。纯化液进一步进行酶解结晶,得到了纯度为98%,绝对含量为95.6%的D-7ACA结晶干粉。本研究开发了一种DCPC回收的新方法,利用调碱沉淀去除蛋白类杂质,利用吸附层析和离子交换层析去除小分子杂质,获得较高纯度的DCPC。本研究为降低CPC生产企业降低抗生素对环境的影响以及获得高附加值的头孢类中间体奠定了基础。
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