钙结合蛋白S100A16基因敲除小鼠的构建以及S100A16对高脂饮食诱导下肥胖小鼠糖脂代谢的影响及其机制研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:yxdtlwj
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:构建钙结合蛋白(Calcium-binding protein)S100A16基因全身敲除小鼠模型,高脂喂养构建饮食诱导肥胖小鼠模型(Diet induced obesity model,DIO),同时利用HepG2细胞系构建胰岛素抵抗模型,进一步探讨S100A16的生物学功能及其在肥胖和胰岛素抵抗中的作用及其机制。方法:第一步:利用基因表达调控系统(即Cre/loxP系统)构建S100A16全身敲除小鼠。采用聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白质印迹(Western blot,WB)方法验证其转录及翻译水平的表达。第二步:选用5周龄的S100A16全身敲除小鼠(杂合子小鼠,S100A16Ko+/-)与正常C57BL/6(B6,即野生型Wild type,WT)雄性小鼠为研究对象,进行高脂喂养构建饮食诱导肥胖小鼠模型。将2种不同基因型的小鼠随机分成正常饮食组(No high fat,NFD)和高脂饮食组(High fat,HFD),共4组,①正常对照组(NFDWT),n=10、②B6高脂组(HFDWT),n=10、③S100A16 Ko+/-普脂组(NFD+/-),n=10、④S100A16Ko+/-高脂组(HFD+/-),n=10。不同饮食喂养13周,每周称量并记录小鼠体重、随机血糖、于5周龄和17周龄时进行腹腔糖耐量试验(Introperitoneal glucose tolerance test,IPGTT)和于6周龄和18周龄时进行胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test,ITT)。18周时取材,取血测定血清甘油三脂(Triglyceride,TG)、总胆固醇(Cholesterol,TC)等糖脂代谢相关生化指标;记录附睾、肾周等内脏脂肪重量,并利用病理染色方法观察病理学改变,同时应用RT-PCR、WB等实验手段检测S100A16及相关基因在小鼠脂肪及肝脏组织中的表达,初步探索其相关作用机制。构建动物模型的同时细胞模型。采用10-7μmol/L胰岛素诱导人HepG2肝癌细胞系产生胰岛素抵抗,分析胰岛素抵抗与S100A16的关系。结果:(1)S100A16基因全身敲除杂合子(S100A16 Ko+-)小鼠可成功饲养繁殖,子代雌雄性别出生率无差异;目前仍未生出纯合子小鼠(KO-/-)。S100A16Ko+/-小鼠脂肪、骨骼肌、肝脏、心肌、肺组织中S100A16转录水平与蛋白表达量显著下降。(2)DIO模型中,普脂S100A16 Ko+/-组与正常对照组相比:体重、脂肪重量、TG、TC、LDL无明显差异。给予高脂饮食后,高脂组与普脂组相比:体重、脂肪重量、TG、TC、LDL明显增加,S100A16、Wnt和β-catenin上调。高脂S100A16 Ko+/-组与高脂WT组相比:体重、脂肪重量、TG明显下降,S100A16、Wnt和 β-catenin下调,HDL上调。(3)胰岛素诱导人HepG2细胞系发生胰岛素抵抗,结果发现IRS-2下调,S100A16表达上调。结论:(1)成功建立了 S100A16全身敲除小鼠模型,为进一步研究S100A16的生物学功能及分子机制提供了动物模型。(2)S100A16与体重的增加和脂肪的聚集密切相关,S100A16可能通过影响Wnt/β-catenin通路从而对肥胖进行调节。(3)S100A16与胰岛素抵抗相关。S100A16在机体广泛表达,具有多种生物学功能。未生出纯合子小鼠,可能提示我们S100A16与生殖或胚胎致畸相关。后期,我们可以在细胞水平利用Wnt/β-catenin通路的特异性阻断剂ICG-001阻断这一通路,观察S100A16的变化。同时可以利用高通量技术(基因芯片、质谱分析等)筛选相关作用底物。S100A16与肥胖和胰岛素抵抗相关,但其具体的分子机制还需进一步深入研究。
其他文献
1981年,我们组织洞庭湖区的常德、安乡、沅江、南县、益阳、华容、湘阴等7县,协作开展了杂交晚稻适应性的研究,探索高产栽培技术;筛选适合湖区种植的杂交晚稻新组合,取得了满
沙打旺学名Astragalus adsurgensPall,又名直立黄芪,在我国东北、华北、西北、西南等地近年来都有栽培。河南、山东、江苏、河北四省的邻近地区都有野生群落。沙打旺抗旱抗寒
本文通过对荣华二采区10
期刊
毕业于国际关系学院国际经贸专业,曾在国家机关和事业单位工作长达13年,主要从事财经工作。之后担任过世界500 强金融公司的项目组经理。现为世元金行分析师,在2012年9 月份时投资战绩曾达到6个月资金收益翻11倍。  热播电视剧《老有所依》中的江木兰和吕希,是80后独生子女夫妻的典型代表。他们成为小家庭的核心力量后,上有老下有小,成为了家庭理财的中心环节。处于“421”家庭中每个年龄段的人,都面临
新棉291是我所以陕棉4号为母本,刘庄1号(中棉所8号选系)为父本杂交选育而成的高产、优质、耐病、不早衰,适应性强的棉花新品种。经几年的试种,多数试点与试种单位反映很好,
目的:1.比较常规超声和经颅超声造影(Contrust-enhanced Transcranial Color-CodedSonography,CE-TCCS)对Willis环和颅内大动脉的显示率差异;2.比较造影前后颅内大血管血流动力学
16团场粮食作物中以小麦生产为主。历年播种面积占粮食作物的60%左右,1982年占71%,小麦总产占粮食总产的72.9%。 过去由于受“左”的思想影响,不重视科学种田,因而小麦单产一直
今年我省小麦生产,在省委、省府的正确领导下,认真贯彻了党的三中全会以来的方针和政策,实行了各种形式的生产责任制,调动了广大干群的生产积极性,在多年水利建设的基础上,
目的:对经皮腰椎间盘摘除术(Microendoscopic discectomy,MED)术后患者腰痛的危险因素和影像学改变的评估与分析。  方法:把入组的132名患者按随访时间长短分为三组,患者按术
切换到房地产模式,会有“情节雷同”之感。房地产十年嬗变,大鳄来袭,带来最大的变化即是:如果你坚守用了10多年的打法,那就要承担被击败的风险。因为对手在变、环境在变。无