【摘 要】
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该研究利用普通小麦的二倍体祖先野生一粒小麦为材料,构建BAC文库,目的是为开展小麦基因组学的研究奠定一定的技术平台.该文库插入片段平均为104kb,以野生一粒小麦基因的可能
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该研究利用普通小麦的二倍体祖先野生一粒小麦为材料,构建BAC文库,目的是为开展小麦基因组学的研究奠定一定的技术平台.该文库插入片段平均为104kb,以野生一粒小麦基因的可能性大于90﹪,另外分别用叶绿体基因psbA及线粒体基因atp6为探针,通过菌落杂交检测到细胞器DNA的污染率低于1﹪.结论：1、过柱纯化技术是一种操作简单、省时、省钱的方法;2、自连回收可有效的提高载体的质量;3、载体与连续液的反复冻融使转化效率大大降低,而载体和连接液的分装可以避免或减少反复冻融;4、部分酶切前、后的预电泳可以有效的去除小片段DNA的干扰,提高大片段DNA的分离质量和文库的质量;5、100-200kb的大片段DNA的转化效率最高,平均插入片段最大,而大于300kb的片段转化率极低;6、二次电泳技术使大片段DNA质量明显提高且片段整齐度好,而小片段DNA含量明显降低;7、载体与大片段DNA的摩尔比为3～5：1时连接和转化效率较高;8、浓缩连接液可以有效的增加转化效率;9、实验证明混合池经过12个小时的培养后结构仍然稳定.该研究所建野生一粒小麦BAC文库是中国迄今构建的第一个小麦属BAC文库,以该BAC文库为平台可开展基因的图位克隆、物理图谱的构建、着丝粒及端粒的研究等方面的研究工作.
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