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目的：应用混合谱系白血病2（MLL2）抗体体外作用于弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3以及体内作用于种植人LY-3细胞的荷瘤鼠，以探索研究MLL2抗体在弥漫大B细胞淋巴瘤中诱导细胞凋亡的作用。方法：1人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3细胞的培养、传代人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3细胞培养于体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的RPMI1640培养液中，置于37℃、饱和湿度、5%CO2条件的培养箱中培养，48-72小时传代一次。细胞生长良好，悬浮成团。本研究相关实验均采用对数生长期LY-3细胞。2RT-PCR检测LY-3细胞中存在MLL2基因表达取LY-3细胞悬液，提取总RNA，在核酸蛋白测定仪上测定浓度及纯度，根据反转录试剂盒具体实验步骤，使RNA反转录为cDNA，配制PCR反应体系，其中MLL2前引物序列为5’CCAATGCATAAGATCAAG3’，后引物序列为5’CTATGAAAGTCAGCCATC3’，将其置于Realtime PCR仪上进行PCR扩增，然后在电泳槽中点样，由左向右依次加样：5μl Marker，5μl GAPDH，5μl MLL2，点完后，调电泳仪各参数进行电泳：U：120V；A：60A；T：35min，电泳结束，凝胶成像系统观察结果。3MTT法检测MLL2抗体作用于LY-3细胞对细胞增殖的影响取LY-3细胞悬液，调整细胞密度为1×105/ml，按100ul/孔接种于U型96孔板，随机分为对照组及MLL2抗体实验组。对照组及MLL2抗体实验组均设3复孔，对照组各孔中加入100ul细胞培养液，实验组向各孔中分别加入以100ul细胞培养液稀释的不同浓度的MLL2抗体，使其终浓度分别为0.32ug/ml、0.16ug/ml、0.08ug/ml、0.04ug/ml、0.02ug/ml，置于37℃、5%CO2、饱和湿度条件的培养箱中孵育，分别于加药后第24小时、48小时向各孔中加入20ul MTT（5mg/ml）溶液，置于培养箱内继续孵育4小时，离心培养板，吸去上清，每孔再分别加入150ul二甲基亚砜，振荡器振荡至结晶充分溶解，置于酶标仪492nm条件下，测定各孔的吸光度值。4MLL2抗体体内作用于种植人LY-3细胞的荷瘤鼠观察其抗肿瘤作用本实验所用荷瘤鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司，共15只，均为3-4周龄Balb/c雌鼠，后饲养于省四院动物实验中心。首先于体外大量培养并传代LY-3细胞，调整细胞密度为3-4×105/ml，待细胞扩增到一定数量级后，收集细胞悬液并离心，弃上清液，加入RPMI1640液稀释，共3.0ml，并吹打混匀，于15只荷瘤鼠左腋下皮下接种LY-3细胞，每只裸鼠打0.2ml细胞悬液，瘤细胞注射的数量级为10的7次方。接种瘤细胞第6天可以看到约黄豆大小的瘤体，14天瘤体长到约1cm左右，排除3只成瘤效果不理想的荷瘤鼠，将其余12只荷瘤鼠编号，随机分为空白对照组和实验组，每组6只，实验组每隔2日于荷瘤鼠皮下注射MLL2抗体，抗体终浓度为0.16ug/ml，定期观察并测量瘤体大小。MLL2抗体应用2周后，肉眼观察实验组荷瘤鼠的瘤体较对照组缩小，颈椎脱臼处死荷瘤鼠，剥离瘤体，用游标卡尺测量肿瘤的大小，计算肿瘤的体积，并称取瘤体重量。机械法处理肿瘤制成单细胞悬液，提取其总RNA，进行RT-PCR反应，取扩增产物，用琼脂糖凝胶电泳，经EB染色，凝胶成像分析系统分析结果，并提取其总蛋白，采用Western-blot法检测MLL2蛋白表达，通过制备分离胶与浓缩胶、凝胶电泳、转膜、封闭抗体，然后进行显色，采用红外成像系统进行分析与扫描。结果：1LY-3细胞中存在MLL2基因表达提取LY-3细胞RNA后在核酸蛋白测定仪上测定浓度及纯度分别为432.7ng/ul、260/280=1.92，之后依次进行反转录、PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统结果显示LY-3细胞存在MLL2基因表达。2MLL2抗体体外作用于LY-3细胞能够诱导细胞凋亡LY-3细胞经不同浓度MLL2抗体（即0.32ug/ml、0.16ug/ml、0.08ug/ml、0.04ug/ml、0.02ug/ml）处理24、48小时后，应用MTT法检测各标本吸光度值均有不同程度减低，MLL2抗体有抗增殖活性，能够诱导细胞凋亡。相同处理时间条件下，尤其在处理48小时后，在一定浓度范围内，随着MLL2抗体浓度增加，LY-3细胞抑制率呈现逐渐升高的趋势。3MLL2抗体体内作用于种植人LY-3细胞的荷瘤鼠具有抗肿瘤作用实验组MLL2抗体处理的荷瘤鼠，相比对照组瘤体生长速度慢，瘤体缩小，P<0.05，其差异具有统计学意义，剥离瘤体组织后，应用RT-PCR检测mll2基因表达及Western-blot法检测MLL2蛋白表达，显示MLL2抗体组相比对照组，MLL2基因及MLL2蛋白表达均减低。结论：1人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株LY-3细胞存在MLL2基因表达；2在一定浓度范围内，随着MLL2抗体浓度的增加，LY-3细胞抑制率逐渐升高，MLL2抗体具有抗增殖活性，能够诱导细胞凋亡；3MLL2抗体作用于荷瘤鼠体内，能够诱导细胞凋亡，抑制肿瘤生长。