牛粪细菌杀线虫活性筛选及挥发性代谢产物的研究

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植物寄生线虫是农业生产中重要的植物病原之一,使作物减产从而给农业生产带来重大损失。目前细菌已广泛的运用于生物防治中,其代谢产物是新兴的天然化合物的重要来源。细菌产生的多种代谢物中,部分化合物具有抗肿瘤、抑菌、杀虫等活性。  本研究对牛粪中分离得到的细菌进行了杀线虫活性筛选,部分细菌具有产生挥发性杀线虫活性代谢产物的能力,对这些产生挥发性杀线虫代谢产物的细菌进行了分子生物学水平上的鉴定;利用GCMS对其产生的挥发性有机物进行了鉴定,并测试了其产生的挥发性化合物的杀线虫活性。  本文主要研究结果如下:  1.对前期分离的224株牛粪细菌进行杀线虫活性筛选,44株细菌发酵液对秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)具有致死活性,24 h时对秀丽隐杆线虫(C.elegans)致死率达到100%的有23株,占细菌总数的10.27%,22株在1h时活性达到90%以上,占细菌总数的9.82%。对22株高活性菌株进行挥发性杀线虫活性筛选,其中19株能产生毒杀秀丽隐杆线虫(C.elegans)和南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的挥发性代谢产物。  2.对22株高活性细菌进行分子生物学鉴定。基于16S rRNA基因序列的鉴定结果表明,这些细菌分别属于粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、彭氏变形杆菌(Proteus penneri)、豪氏变形杆菌(Proteushauseri)、雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)、木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)、气生微杆菌(Microbacterium aerolatum)、甜菜假单胞菌(Pseudomonas beteli)、烟草节杆菌(Arthrobacter nicotianae)、木糖氧化无色杆菌(Achromobacterylosoxidans、)、Wautersiella falsenii和Pseudochrobactrum saccharolyticum。系统发育分析表明这些不同分类地位的杀线虫细菌聚类形成三个进化分支。  3.利用SPME-GCMS联用法对5株产生杀线虫挥发性代谢产物的细菌进行挥发性产物的鉴定。活性测试结果显示细菌产生的挥发性化合物中,二甲基二硫醚、硫代丁酸甲酯、3-甲基-2-丁烯酸乙酯、苯乙酮、2-壬酮、对甲基苯甲醚和异戊酸丁酯具有杀线虫活性。  本论文的创新性体现为:  1.首次报道了变形杆菌属(Proteus spp.)、普罗威登斯菌属(Providencia spp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)、节杆菌属(Arthrobacter spp.)、无色杆菌属(Achromobacter spp.)、Wautersiella spp.和Pseudochrobactrum spp.具有杀线虫活性。  2.首次报道了硫代丁酸甲酯、3-甲基-2-丁烯酸乙酯、对甲基苯甲醚和异戊酸丁酯具有杀线虫活性
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