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过氧化物酶(Peroxidase, POD, EC1.11.1.7)是广泛存在于各种动物、植物和微生物体内的、其结构和作用机理并不完全相同的一类含血红素的氧化酶,一般含有铁或铜等金属离子,具有多种生理功能。论文以女贞(Ligustrum lucidum Ait.)为材料,研究了女贞叶及果实POD的分离纯化,女贞果实POD热稳定性及海藻糖和β-环糊精的影响,以及女贞果实POD部分酶学性质。从女贞果实中分离得到一种POD,纯化过程包括匀浆、硫酸铵-丙酮协同沉淀、Sephadex G-100凝胶柱层析和DEAE-纤维素阴离子交换层析,纯化倍数为48,回收率13.3%,分子量为22 kDa。从女贞叶质外体蛋白中分离得到单一条带的POD,分子量为62 kDa。女贞叶POD粗酶具有较高的热稳定性,60℃下加热60 min,酶活剩余61%。在35℃、40℃、45℃、50℃水浴中加热一小时后,剩余酶活都在90%以上。在80℃下处理5 min,酶活完全丧失,70℃下处理5 min,酶活剩余71%。在分别添加了适宜浓度的海藻糖和β-环糊精后,女贞叶POD粗酶在60℃下热稳定性分别提高了11%和9.8%。女贞叶POD粗酶最适pH为6.0。纯化后的女贞果实POD最适pH为6.5,最适反应温度为40℃;热稳定性降低,70℃加热5 min,酶活仅剩余26%,60℃下处理60 min酶活剩余44%。女贞果实POD对H2O2的Km值为3.85 mmol/L。底物愈创木酚的Km值为6.2 mmol/L。Ala-Asp和Lys-Val两种短肽能明显提高女贞果实POD在60℃下热稳定性。75μmol/L海藻糖也能有效提高该酶热稳定性,β-环糊精对纯化后的POD没有明显作用,PEG-6000对POD活性表现出抑制作用。