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中药材的鉴定、品质评价是保证入药安全及疗效的重要前提。准确、有效、便捷和实用的方法是中药鉴定和品质评价的新目标,而引进和应用新技术、新方法是实现以卜.目标的重要途径。本文以络石藤及其混伪品(薜荔、地瓜藤及扶芳藤)为研究对象,采用DNA条形码技术对样品的基原进行了准确鉴定;通过高分辨率熔解曲线技术对DNA条形码鉴定方法进行了补充:鉴于市场中会出现快速、无损检测的需求,对络石藤及其混伪品进行了红外光谱三级鉴定;利用高效液相指纹图谱对药材的鉴定结果进行验证并对药材的质量进行评价。主要研究结果如下:1.获得101条络石藤及其混伪品的ITS2序列。ITS2序列的扩增率、测序成功率均为100%,样品ITS2序列长度在220 bp-241 bp之间,GC含量在61.3%-74.1%之间,序列比对长度为267 bp,其中变异位点的个数为126。最小种间遗传距离0.488远大于种内遗传距离0.000,正品与伪品之间有明显的barcoding gap。络石藤及其混伪品ITS2序列的二级结构存在一个中心环和四个类似的螺旋Helix Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,但是在茎环数目、大小、位置和螺旋臂中心角度上表现出明显的差异。构建了系统进化树,络石藤与其混伪品ITS2序列各聚为一支,同时发现LS006和LS041为两个伪品。在物种水平ITS2序列对络石藤及其混伪品的鉴定成功率均为100%。生成了络石藤及其混伪品的DNA条形码二维码,实现了序列的信息转化,使得DNA条形码的应用更加简单,方便。2.建立了络石藤及其混伪品的高分辨率熔解曲线(HRM)模型,络石藤和薜荔的熔解曲线都有三个峰,主峰分别在92.34 ℃和86.95℃;地瓜藤和扶芳藤熔解曲线都有两个峰,主峰分别在92.84℃和91.56℃;络石藤及其混伪品DNA模板在5-200 ng/μL浓度范围内均可获得稳定的熔解曲线,但是熔解温度峰值法所获得的HRM在峰位置上有相对的变化;熔解温度峰值法、标准化熔解曲线及其派生曲线都可以准确鉴定络石藤及其混伪品;络石藤样品LS006的熔解曲线与扶芳藤溶解曲线模型吻合,LS041与薜荔熔解曲线模型吻合,验证了 DNA条形码的鉴定结果:HRM技术可以检测到络石藤中1%的掺杂品。3.一维光谱中,络石藤及其混伪品在1647-1623 cm-1波段内有C=O吸收峰,但是峰位置不同,说明所含黄酮类化合物种类不同;络石藤及其混伪品在1377 cm-1附近都有芳香环的C=C的骨架振动吸收峰,在1318 cm1附近都有草酸钙特征吸收峰,在1034 cm-1附近都有较强的纤维素特征吸收峰;在1000-1250 cm-1波段内,除共有峰,络石藤及其混伪品峰位置和强不同,说明所含糖苷类种类不同。二阶导数光谱中,络石藤在1736 cm-1处的吸收峰可以体现出来;络石藤及其混伪品在1517cm-附近都有芳香环的C=C的骨架振动吸收峰,在1468 cm-1处都有很强的特征吸收峰;在855-1250 cm-1多糖区波段,络石藤及其混伪品1077 cm-1处也出现强的共有峰,除共有峰外,络石藤及其混伪品吸收峰位置和强度不同,进一步说明它们糖苷类化合物的种类不同。三级鉴定中,热微扰对络石藤中黄酮类和木脂素类化合物的影响较大,薜荔组成分中的黄酮类和糖苷类化合物受热微扰影响较大,地瓜藤总体来说受热微扰影响不大,相对来说热微扰对地瓜藤的酮类和脂类成分影响较大,扶芳藤中的黄酮类,醇类以及糖苷类化合物受热微扰影响较大:络石藤及其混伪品在1805-855 cm-1波段,自动峰的个数和最强自动峰位置不同。聚类分析结果表明,络石藤与其混伪品各聚一支。同时发现LS006和LS041为伪品,鉴定结果为扶芳藤和薜荔,进一步验证了 DNA条形码的鉴定结果。4.确定了(10:90)-(30:70)15 min-(40:60)40 min-(60:40)75 min 为最佳色谱条件。通过比较络石藤及其混伪品的高效液相色谱指纹图谱,鉴别出LS006和LS041为市场上流通的络石藤药材的混伪品;建立络石藤药材的对照指纹图谱,以共有峰模式为基础,进行相似度评价,相似度在0.90以上的络石藤药材有64批,占总数的80%;相似度在0.85-0.90之间的有9个样品,相似度小于0.85的有7个样品;测定络石藤药材中络石苷含量,根据2015版中国药典标准,有6个络石藤样品的络石苷含量低于0.40%,虽然是络石藤正品,但为不合格品。