论文部分内容阅读
目的：研究当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢（H2O2）所致PC12细胞损伤的影响并探讨其作用机制。方法：本研究采用不同剂量H2O2以不同时间作用于PC12细胞，筛选出最佳损伤剂量及时间，最终选用200μmol·L-1H2O2与PC12细胞共同孵育6h，建立细胞氧化应激损伤模型，加用高(1.5g·L-1)、中(0.75g·L-1)、低(0.375g·L-1)三个不同剂量的当归红芪超滤膜提取物（10万分子量）进行干涉分组，实验共分为5组：对照组，模型组，当归红芪超滤膜提取物高剂量组，当归红芪超滤膜提取物中剂量组，当归红芪超滤膜提取物低剂量组。用MTT法测定各组细胞存活率的变化；采用生化法检测细胞脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性；采用双氯荧光黄乙酸乙酯（DCF-DA）染色，荧光酶标仪检测细胞内活性氧（ROS）的含量；采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率；采用罗丹明123（RH123）染色，激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位变化；用蛋白印迹法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2相关蛋白的表达。结果：1.各组细胞存活率的变化：H2O2损伤PC12细胞后细胞活力下降明显，与对照组相比，模型组PC12的存活率明显下降（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组PC12的存活率均明显增加（p<0.05），以高剂量组最为显著。2.各组细胞MDA、LDH、SOD的检测结果：与对照组相比，模型组MDA、LDH含量增多，SOD含量下降（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组MDA、LDH均含量降低，SOD含量均增加（p<0.05）。3.各组细胞内ROS含量的检测结果：与对照组相比，模型组ROS的含量明显增多（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组ROS含量均显著降低（p<0.05）。4.各组细胞凋亡率的检测结果：与对照组相比，模型组PC12细胞凋亡增加显著（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组细胞凋亡明显降低（p<0.05）。5.细胞线粒体膜电位检测结果：与对照组相比，模型组PC12细胞内RH123荧光强度明显减弱，线粒体膜电位降低（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组PC12细胞内RH123荧光强度均明显增强，线粒体膜电位升高（p<0.05）。6. Caspase-3、Bax和Bcl-2检查结果：与对照组相比，模型组Caspase-3、Bax蛋白表达增强，Bcl-2表达减弱，Bcl-2/Bax比值降低（p<0.05）；与模型组相比，当归红芪超滤膜提取物干涉组Bax、Caspase-3蛋白表达均减弱，Bcl-2表达均增强，Bcl-2/Bax比值升高（p<0.05）。结论：1.当归红芪超滤膜提取物对过氧化氢诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。2.当归红芪超滤膜提取物可以通过降低氧化损伤的PC12细胞胞内MDA、ROS的含量，增加细胞SOD活力来加强细胞抗氧化能力，维持膜结构的完整性，减少氧自由基对细胞的损伤而有效保护细胞。3.当归红芪超滤膜提取物能够稳定H2O2诱导的PC12细胞线粒体膜电位，降低细胞caspase-3、Bax的表达，增加Bcl-2的表达，保护线粒体功能，减少细胞凋亡。