背景和目的 几丁质又称甲壳素,在昆虫、甲壳类动物外骨骼、真菌细胞壁及某些绿藻中广泛存在,是自然界中最丰富的生物资源之一。几丁质及其部分脱乙酰化产物壳聚糖具多种生理功能,如抑瘤、抗菌、免疫增强等。但是他们的高粘度和低水溶性极大地限制了其在体内的应用。于是低分子量的降解产物壳寡糖以其良好的水溶性和无毒性及良好的组织相容性日渐受到重视。 巨噬细胞是免疫细胞,也是重要的抗原呈递细胞。它通过吞噬、抗原呈递、分泌细胞因子、激活淋巴细胞和产生活性氧、NO等,发挥免疫应答和免疫调节、抗感染、抗肿瘤等作用,是机体免疫系统的重要组成部分,是免疫功能的重要行驶者。 已有文献报导壳寡糖在整体动物实验中能激活巨噬细胞,增强其杀伤活性,并诱导如白介素—1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒单核集落刺激因子(GM-CSF)、白介素—6(IL-6)等细胞因子的分泌,增强T细胞核NK细胞的活性。但壳寡糖与巨噬细胞的结合机制,特别是壳寡糖在巨噬细胞表面的受体报导甚少。 本实验将甘露糖受体的配体—甘露聚糖用荧光物质进行标记,观察其在其它甘露糖受体的竞争性抑制剂及壳寡糖存在的情况下,与小鼠RAW264.7巨噬细胞的结合情况。以此了解巨噬细胞壳寡糖结合组分的糖结合特异性。通过本实验为进一步阐明壳寡糖对巨噬细胞的免疫调节机理和分离巨噬细胞壳寡糖结合组分提供一定的实验依据,为壳寡糖抗肿瘤药物和功能食品的开发提供理论依据。这对于海洋资源的开发利用具有重要的意义。 材料和方法 1.壳寡糖的制备:复合纤维素酶水解壳聚糖,有机溶剂提