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目的探讨维生素D对烟草致癌物诱发肺癌发生的影响方法1采取灌胃的方式给予Balb/c小鼠补充维生素D。维生素D以无水乙醇作为溶剂,最终乙醇浓度为5%。实验分为空白组(补充5%的乙醇溶剂)、10IU维生素D组(补充维生素D10IU/kg/d)、20IU维生素D组(补充维生素D20IU/kg/d)、40IU维生素D组(补充维生素D40IU/kg/d)。4周后,化学发光法检测血清维生素D。2免疫组化检测骨形态发生蛋白2(BMP-2)和环氧合酶2(COX-2)在人体肺癌和癌旁组织中的表达。3用NNK 100mg/kg一次腹腔注射A/J小鼠建立肺癌模型。NNK以生理盐水为溶剂。维生素D以无水乙醇作为溶剂,最终乙醇浓度为5%。在注射NNK前一周开始给予不同干预,直到实验结束。实验分为空白组(腹腔注射生理盐水+补充5%的乙醇溶剂)、NNK组(腹腔注射NNK+补充5%的乙醇溶剂)、20IU维生素D干预组(腹腔注射NNK+补充维生素D20IU/kg/d)、40IU维生素D干预组(腹腔注射NNK+补充维生素D40IU/kg/d)。注射NNK后16周,麻醉状态下,眼球取血,检测血清维生素D和钙。对小鼠肺部肿瘤进行计数,计算肺癌发病率和发病数。对胃、肝、肾、肺等脏器进行HE染色,行病理分析。免疫组化检测小鼠肺肿瘤BMP-2和COX-2蛋白的表达。4用B(a)P50mg/kg/次灌胃Balb/c小鼠,一周两次,连续五周,共计10次,建立肺癌模型。B(a)P以橄榄油为溶剂。实验分为空白组(灌胃橄榄油+补充5%的乙醇溶剂)、B(a)P组(灌胃B(a)P+补充5%的乙醇溶剂)、20IU维生素D干预组(灌胃B(a)P+补充维生素D20IU/kg/d)、40IU维生素D干预组(灌胃B(a)P+补充维生素D40IU/kg/d)。第一次给予B(a)P后30周统一处死小鼠。检测指标同3。结果1维生素D喂饲4周后,小鼠血清维生素D有所上升。空白组、10、20、40IU维生素D组血清维生素D(ng/ml)分别为7.24±0.22、7.82±0.33、8.98±0.56、12.04±1.98。2 BMP-2和COX-2蛋白均在细胞质中表达。BMP-2在肺癌组织中的阳性表达率为77.8%(35/45),在癌旁组织中无表达(0/12)；COX-2在肺癌组织中的阳性表达率为71.1%(32/45),癌旁组织中阳性表达率为8.3%(1/12)。3 NNK组、20IU维生素D干预组、40IU维生素D干预组A/J小鼠肺癌发病率均为100%,肺癌发病数分别为1.80+0.84、1.60±0.89、1.60±0.55(p>0.05)。各组均未见高钙血症和小鼠肾脏损伤。与NNK组相比40IU维生素D干预组和20IU维生素D干预组的体重增长受到抑制(p<0.05)；肺癌组织中BMP-2、COX-2蛋白的表达由高到低分别为NNK组、20IU维生素D干预组、40IU维生素D干预组(p<0.05)。4 B(a)P组、20IU维生素D干预组、40IU维生素D干预组Balb/c小鼠肺癌发病率均为100%,肺癌发病数分别为11.90±2.77、5.40+1.90、2.404-1.35(p<0.05)。与B(a)P组相比40IU维生素D干预组和20IU维生素D干预组的体重增长受到抑制(p<0.05)；肺癌组织中BMP=2、COX-2蛋白的表达由高到低分别为B(a)P组、20IU维生素D干预组、40IU维生素D干预组(p<0.05)。结论1经胃肠道给予小鼠补充维生素D是一种安全有效的方法。2 BMP-2和COX-2蛋白在肺癌组中表达增高,进一步研究两者在肺癌中的作用对于肺癌的防治具有重要意义。3维生素D(20IU/kg/d)、40IU/kg/d)对NNK诱发A/J小鼠肺癌的发病率和发病数没有影响,但是维生素D能抑制BMP-2和COX-2在肺癌中的表达。说明维生素D在不影响肿瘤发病率和发病数的情况下,仍然能通过抑制肿瘤标记物的表达而发挥抑癌作用。4维生素D(20IU/kg/d)、40IU/kg/d)对B(a)P诱发Balb/c小鼠肺癌的发病率没有影响,但是对肺癌发病数有抑制作用。维生素D对肺癌发病数的抑制作用一定程度上与抑制BMP-2和COX-2的表达相关。5维生素D(20IU/kg/d)、40IU/kg/d)可以在发挥抑癌作用的同时不产生高钙血症、肾脏损伤等副作用,为维生素D应用于临床研究维生素D对肺癌的防治提供理论依据。